※ 引述《[email protected] (skylawer)》之銘言： > ─────────────────────────────────────── > ※ 引述《pan7353 (要變成自己喜歡的模樣)》之銘言： > : 不好意思 這個問題我其實已經問過一次了 但是還是沒有解決 > : 我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的) > : 放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接) > : 藍白篩選了六個 colony 做 PCR 結果都有 specific 的片段(用insert DNA的primer P) > : 挑了四個 colony 送定序後 結果四個都沒有 insert DNA 的序列 > : (用 vector 上的 M13 定序) > : 甚至連當初做 colony PCR 的 primer 序列都沒有 > : 我已經試過的方法 > : 1.換 pGEMT system 其他一樣 無效(因為我懷疑 colony PCR P 到 vector 上其他序列) > : 2.定序結果我有試過互補和反轉的序列了 都一樣 定序結果只有 vector 序列 > : 3.直接抽 plasmid 用RE切 結果顯示沒有插入任何片段 > : 4.把當初 PCR 得到的 insert 片段直接送定序 結果是正確的序列 > : 5.另外 我們實驗室有三個人做 cloning 都發生一樣的情況 就是 colony PCR 有 band > : 但定序回來都只剩下 vector 序列 > : 抱歉 問題有點長 其實我的重點就是 為何colony PCR 可 P 到 定序卻無結果?> : 那麼 colony PCR 究竟 P 到了什麼東西勒? > 1. 你挑的是藍的還是白的?. > 2. 你的insert 的來源是那裡?. > 3. 放個沒有transform 的 E.coli 再 PCR 一次看看 > 順便做一個只放空vector (沒有菌) 與你的primer 再做一次 > 以上簡單兩個control就能回答你問題 > 4. colony PCR 用 vector 本身的 primer 來 amplify 比較不易出錯 s大大的control很有趣 是個好辦法 但我滿好奇的 為何不抽質體然後切割確認 而要以pcr方式 單純想知道為什麼而已 -- 如果美麗必須成為過去 別忘了臨走時 請將記憶裝入行囊 順便關上曾經為你而開的窗 -- ╭─ Origin ─╗ 新綠園 bbs.sa.ncyu.edu.tw ～ κλμ ─┤ ├ Author ╡ 098063.CAGR.ncyu.edu.tw