作者fungihsu (Work hard/Play hard)
看板Biotech
標題Re: [問題] 萃取DNA
時間Mon Apr 2 23:41:02 2007
※ 引述《anotherway (Anita才是王道)》之銘言：
: 可以請各位推薦一下 抽DNA的KIT嗎
: 目前我用的是BIO-RAD 抽一批樣品(約40個sample) 大概得花6-7小時..(汗)
: 可怕的是 抽出來的品質不怎麼樣
: 請各位推薦一下好產品吧
: 謝謝
: ※ 引述《anotherway (Anita才是王道)》之銘言：
: : 關於萃取DNA時
: : 如果最後沒將酒精完全揮發
: : pellet沒有完全乾燥就回溶
: : 會影響PCR的結果嗎
: : 因為老闆給我的Protocol是讓pellet自然晾乾(室溫20min)
: : 但每次幾乎都沒乾過 = =|||
: : 然後電泳看DNA quality 都出現一陀的亮帶兼smear...(不sharp)
: : PCR的結果也就時好時壞(同樣條件去跑)
: : 請問各位高手
: : 這個步驟出差錯會產生什麼結果
如果是做miniprep的話
我很推薦eppendorf的FastPlasmid mini
這個系統用的方法是用酵素把細胞打破
所以步驟上只加一次溶液
而不是加P1, P2, P3
所需要的時間如果樣品的數量不太多的時候可以在30min內做完
我通常做18個樣品的時候 (這樣是離心機可以放的最大管數)
一個小時內一定可以做完
DNA的品質還有量跟Qiagen miniprep差不多甚至有時比較好
另外關於跑DNA gel看到亮帶跟smear
如果那個亮帶跟smear是在低分子量的地方出現
有沒有可能是rRNA 跟 mRNA?
要確定有加RNase到P1
Hope this helps.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 130.126.51.136
1F：推 anotherway:亮帶是在高分子量的地方 跟HindIII Marker比較 04/03 18:52
2F：→ anotherway:確定有加RNase 也有RNA跑出來在低分子量的地方 04/03 18:53
3F：推 anotherway:謝謝你^^ 04/03 18:55
4F：推 fungihsu:高分子量的很有可能是細菌的genomic DNA 04/03 20:34
5F：→ fungihsu:你是用miniprep column嗎? 04/03 20:35
6F：→ fungihsu:這種情形通常我只有做midiprep 不用column純化才會看到 04/03 20:36
7F：推 fungihsu:要注意加了P2跟P3之後都不可以vortex 04/03 20:39
8F：→ fungihsu:如果在P3之後是用離心把細菌debris離下來後 取上清液的話 04/03 20:40
9F：→ fungihsu:避免取到debris 04/03 20:42
10F：→ fungihsu:通常這樣離下來的pellet都很鬆 04/03 20:43