作者fungihsu (Work hard/Play hard)
看板Biotech
标题Re: [问题] 萃取DNA
时间Mon Apr 2 23:41:02 2007
※ 引述《anotherway (Anita才是王道)》之铭言：
: 可以请各位推荐一下 抽DNA的KIT吗
: 目前我用的是BIO-RAD 抽一批样品(约40个sample) 大概得花6-7小时..(汗)
: 可怕的是 抽出来的品质不怎麽样
: 请各位推荐一下好产品吧
: 谢谢
: ※ 引述《anotherway (Anita才是王道)》之铭言：
: : 关於萃取DNA时
: : 如果最後没将酒精完全挥发
: : pellet没有完全乾燥就回溶
: : 会影响PCR的结果吗
: : 因为老板给我的Protocol是让pellet自然晾乾(室温20min)
: : 但每次几乎都没乾过 = =|||
: : 然後电泳看DNA quality 都出现一陀的亮带兼smear...(不sharp)
: : PCR的结果也就时好时坏(同样条件去跑)
: : 请问各位高手
: : 这个步骤出差错会产生什麽结果
如果是做miniprep的话
我很推荐eppendorf的FastPlasmid mini
这个系统用的方法是用酵素把细胞打破
所以步骤上只加一次溶液
而不是加P1, P2, P3
所需要的时间如果样品的数量不太多的时候可以在30min内做完
我通常做18个样品的时候 (这样是离心机可以放的最大管数)
一个小时内一定可以做完
DNA的品质还有量跟Qiagen miniprep差不多甚至有时比较好
另外关於跑DNA gel看到亮带跟smear
如果那个亮带跟smear是在低分子量的地方出现
有没有可能是rRNA 跟 mRNA?
要确定有加RNase到P1
Hope this helps.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 130.126.51.136
1F：推 anotherway:亮带是在高分子量的地方 跟HindIII Marker比较 04/03 18:52
2F：→ anotherway:确定有加RNase 也有RNA跑出来在低分子量的地方 04/03 18:53
3F：推 anotherway:谢谢你^^ 04/03 18:55
4F：推 fungihsu:高分子量的很有可能是细菌的genomic DNA 04/03 20:34
5F：→ fungihsu:你是用miniprep column吗? 04/03 20:35
6F：→ fungihsu:这种情形通常我只有做midiprep 不用column纯化才会看到 04/03 20:36
7F：推 fungihsu:要注意加了P2跟P3之後都不可以vortex 04/03 20:39
8F：→ fungihsu:如果在P3之後是用离心把细菌debris离下来後 取上清液的话 04/03 20:40
9F：→ fungihsu:避免取到debris 04/03 20:42
10F：→ fungihsu:通常这样离下来的pellet都很松 04/03 20:43