: 要用不一樣比較好 : 因為加二抗時認的是一抗的 Fc : 如果連 IP 也有一樣的 Fc : 那會有辨認錯誤的狀況發生 : 結果會變成有磷酸化和無磷酸化訊號差別不大 : (Fc:Antibody 的尾端) : 另一種狀況是有跑 SDS-PAGE : 此時的 IP 用的 Antibody 的 heavy chain (就是有 Fc 的那一端) : 會大約在 50kD 左右的位子 : 所以你的目標蛋白質不在這個範圍就可以用同樣的 : 為什麼呢 : 因為當你用二抗時 50kD 這個位子也會被辨認到(IP 和 WB 1抗 同為 Rabbit 時) : 如果你的目標蛋白質剛好在這附近 : 就會被他"強大"的訊號遮蔽 : 我表達的不是很好 : 希望你看的懂 : P.S. 我們實驗室也用過一樣的 結果我們的目標蛋白質也在 50kD 附近 : 就發現了這個問題 喔喔喔我懂了 嗯我的分子是大約34kD左右 應該是ok的 我試試好了 真的是太謝謝您了 那再請問一下 1. 我做IP所用的beats是protein A 他不是會跟IP antibody結合嗎(2抗的功用)? 那為什麼還會有IP antibody的Fc跑出來呢? 2. Control組作WB所用的抗體也是要用IP那一支嗎? 還是可以用別支已經知道可以抓到目標蛋白的抗體呢? --

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