: 要用不一样比较好 : 因为加二抗时认的是一抗的 Fc : 如果连 IP 也有一样的 Fc : 那会有辨认错误的状况发生 : 结果会变成有磷酸化和无磷酸化讯号差别不大 : (Fc:Antibody 的尾端) : 另一种状况是有跑 SDS-PAGE : 此时的 IP 用的 Antibody 的 heavy chain (就是有 Fc 的那一端) : 会大约在 50kD 左右的位子 : 所以你的目标蛋白质不在这个范围就可以用同样的 : 为什麽呢 : 因为当你用二抗时 50kD 这个位子也会被辨认到(IP 和 WB 1抗 同为 Rabbit 时) : 如果你的目标蛋白质刚好在这附近 : 就会被他"强大"的讯号遮蔽 : 我表达的不是很好 : 希望你看的懂 : P.S. 我们实验室也用过一样的 结果我们的目标蛋白质也在 50kD 附近 : 就发现了这个问题 喔喔喔我懂了 嗯我的分子是大约34kD左右 应该是ok的 我试试好了 真的是太谢谢您了 那再请问一下 1. 我做IP所用的beats是protein A 他不是会跟IP antibody结合吗(2抗的功用)? 那为什麽还会有IP antibody的Fc跑出来呢? 2. Control组作WB所用的抗体也是要用IP那一支吗? 还是可以用别支已经知道可以抓到目标蛋白的抗体呢? --

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