※ 引述《JeffreyS (念)》之銘言： : ※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之銘言： : : 請教各位先進 : : 如果我把EGFP放進BL21 : : IPTG induction後 : : 可以純化出一管會發螢光的蛋白質嗎？ : : 一時好奇......有人試過嗎？謝謝？ : (個人沒有試過 不過 覺得這是一個很有趣的問題 可以當成思考練習:p) : 可以先試想 : eGFP是怎樣的一個蛋白: : 他與原始自然界水母的GFP有什麼不一樣呢? : 分子量非常大嗎? : 具有複雜的修飾 或是需要別的蛋白來幫它摺疊成正確的形狀嗎? : 還是 需要經過別的酵素加工切成成熟的模樣呢? 我個人是從另一個角度來看，聽到fluorescent protein第一件事情就該先搞清楚 「為什麼它會發光而其他蛋白質不會，它特殊到底在哪裡？」 在我沒搞清楚之前絕對不會安心做下一步的實驗， 如果不知道這些，到底要怎麼設計實驗啊？ 說不定異常的pH or 異常的溫度 or 異常的某化合物的濃度.... 通通都有「可能」抑制它發光啊~~不搞清楚還得了!? "GFPs undergo a post-translational self-modification process that yields an intrinsic fluorophore constructed from an internal main-chain cross-link..." Acc. Chem. Res., 40 (2), 120 -127, 2007 : 如果查不到資料呢 那換個角度想好了 : eGFP可以做什麼研究? : 很常見的用法之一 便是把他接在我們要看的蛋白上 : 可以不用經過繁瑣的免疫螢光染色法 只要直接把表現細胞拿到螢光顯微鏡下一看 : 有綠沒綠 有沒有表現 一看就知道 : 還可以用Sorting的技術 來把表現量高的細胞挑出來 或是用Flow來定量 : 這是做蛋白質功能性研究很方便的一個工具 : (就像是在滿滿的不好笑joke海裡 可以輕鬆的靠m標記 來找出真正的笑點) : 所以 eGFP不應該是一個很難做又很大的蛋白 : 不然 被我們強迫接上的目標蛋白 不就變成像是拖了鉛球的囚犯 無法發會正常的功能!! 要是你知道這麼多關於eGFP的研究，似乎不太可能不知道它的發光機制:P : 囉哩囉唆嘴砲了這麼多 : 其實 eGFP能不能在細菌上表現 我們應該可以得到一個可靠的假設了 : 接下來 就是實驗驗證啦 : 那嚜 根據別人的實驗結果 發現 運氣很好的和我們的假設相符 : 細菌真的可以做出會亮的eGFP protein : (原來的寫法 好像不能表達真正想說的 修改了一下 : 實驗中或是讀paper的時候 常常會有很多的突發奇想 : 可以試著在查前人有沒有動手驗證過我的奇想前 先推論一下實驗該如何做 或是 : 應該的結果 : 可以得到很多樂趣的~而且應該對於論文討論的寫作幫助很大:p) --

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