※ 引述《JeffreyS (念)》之铭言： : ※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之铭言： : : 请教各位先进 : : 如果我把EGFP放进BL21 : : IPTG induction後 : : 可以纯化出一管会发萤光的蛋白质吗？ : : 一时好奇......有人试过吗？谢谢？ : (个人没有试过 不过 觉得这是一个很有趣的问题 可以当成思考练习:p) : 可以先试想 : eGFP是怎样的一个蛋白: : 他与原始自然界水母的GFP有什麽不一样呢? : 分子量非常大吗? : 具有复杂的修饰 或是需要别的蛋白来帮它摺叠成正确的形状吗? : 还是 需要经过别的酵素加工切成成熟的模样呢? 我个人是从另一个角度来看，听到fluorescent protein第一件事情就该先搞清楚 「为什麽它会发光而其他蛋白质不会，它特殊到底在哪里？」 在我没搞清楚之前绝对不会安心做下一步的实验， 如果不知道这些，到底要怎麽设计实验啊？ 说不定异常的pH or 异常的温度 or 异常的某化合物的浓度.... 通通都有「可能」抑制它发光啊~~不搞清楚还得了!? "GFPs undergo a post-translational self-modification process that yields an intrinsic fluorophore constructed from an internal main-chain cross-link..." Acc. Chem. Res., 40 (2), 120 -127, 2007 : 如果查不到资料呢 那换个角度想好了 : eGFP可以做什麽研究? : 很常见的用法之一 便是把他接在我们要看的蛋白上 : 可以不用经过繁琐的免疫萤光染色法 只要直接把表现细胞拿到萤光显微镜下一看 : 有绿没绿 有没有表现 一看就知道 : 还可以用Sorting的技术 来把表现量高的细胞挑出来 或是用Flow来定量 : 这是做蛋白质功能性研究很方便的一个工具 : (就像是在满满的不好笑joke海里 可以轻松的靠m标记 来找出真正的笑点) : 所以 eGFP不应该是一个很难做又很大的蛋白 : 不然 被我们强迫接上的目标蛋白 不就变成像是拖了铅球的囚犯 无法发会正常的功能!! 要是你知道这麽多关於eGFP的研究，似乎不太可能不知道它的发光机制:P : 罗哩罗唆嘴炮了这麽多 : 其实 eGFP能不能在细菌上表现 我们应该可以得到一个可靠的假设了 : 接下来 就是实验验证啦 : 那嚜 根据别人的实验结果 发现 运气很好的和我们的假设相符 : 细菌真的可以做出会亮的eGFP protein : (原来的写法 好像不能表达真正想说的 修改了一下 : 实验中或是读paper的时候 常常会有很多的突发奇想 : 可以试着在查前人有没有动手验证过我的奇想前 先推论一下实验该如何做 或是 : 应该的结果 : 可以得到很多乐趣的~而且应该对於论文讨论的写作帮助很大:p) --

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