作者FromWood (布貓抱抱)
看板Biotech
標題[問題] 請問有沒有人在做protein上的醣染色
時間Fri Mar 23 16:19:05 2007
現在在做蛋白上的醣染
就是在跑完SDS PAGE後針對Glycoprotein做染色
使用的是 PIERCE GelCode系列 Glycoprotein staining kit
產品如下
http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=ProductFamily&ID=02051020
簡單來說就是將膠先用methamol固定，
再將背景buffer置換成醋酸，
氧化，染色，還原，
以水洗過之後
再置於醋酸中(保存)。
理論上在還原劑下去之後是中止反應，
具有醣修飾的蛋白會被染成洋紅色。
我們的確也在最後完成的時候可以看見清楚的band，
但在用玻璃紙封膠的完畢乾燥之後，
整塊膠都變成一桶洛神花茶一樣的深桃紅色 (￣□￣|||)a
在試過幾次之後
因為曾經有一次不小心讓膠在水裡多放了10幾秒
發現膠變成淡淡的粉紅色
所以我們猜想應該跟水有關係....
到後來就乾脆直接用醋酸封膠，
然後還是得到深桃紅的膠.....
詭異的是，曾經有兩個前輩做過這實驗，
卻是淺淺的粉紅色背景。
但是他們表示就是照著protocal做沒有更改什麼
@@....
不知道有沒有哪位版友做過類似實驗的，可以提供點意見嗎?
感激不盡。
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◆ From: 211.75.190.126
1F：推 aggaci:我猜是醋酸沒洗乾淨，因為銀染也是這樣！ 03/23 20:40
2F：推 FromWood:請問樓上 是說reduse後要用大量醋酸洗嗎 03/24 02:38
3F：→ FromWood:或是說醋酸後要用大量水洗?? 謝謝^^ 03/24 02:39
4F：推 aggaci:洗到完全沒醋酸味，多洗幾次嚕 03/24 15:02
5F：推 datro:Schiff's Stain好像本來就不能久放 要在一定時間內紀錄 久了 03/24 23:24
6F：→ datro:就會變成 紅吱吱的 老闆拿過他以前的膠來看 都馬是紅的一片 03/24 23:25