作者FromWood (布猫抱抱)
看板Biotech
标题[问题] 请问有没有人在做protein上的醣染色
时间Fri Mar 23 16:19:05 2007
现在在做蛋白上的醣染
就是在跑完SDS PAGE後针对Glycoprotein做染色
使用的是 PIERCE GelCode系列 Glycoprotein staining kit
产品如下
http://www.piercenet.com/Objects/View.cfm?type=ProductFamily&ID=02051020
简单来说就是将胶先用methamol固定，
再将背景buffer置换成醋酸，
氧化，染色，还原，
以水洗过之後
再置於醋酸中(保存)。
理论上在还原剂下去之後是中止反应，
具有醣修饰的蛋白会被染成洋红色。
我们的确也在最後完成的时候可以看见清楚的band，
但在用玻璃纸封胶的完毕乾燥之後，
整块胶都变成一桶洛神花茶一样的深桃红色 (￣□￣|||)a
在试过几次之後
因为曾经有一次不小心让胶在水里多放了10几秒
发现胶变成淡淡的粉红色
所以我们猜想应该跟水有关系....
到後来就乾脆直接用醋酸封胶，
然後还是得到深桃红的胶.....
诡异的是，曾经有两个前辈做过这实验，
却是浅浅的粉红色背景。
但是他们表示就是照着protocal做没有更改什麽
@@....
不知道有没有哪位版友做过类似实验的，可以提供点意见吗?
感激不尽。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.190.126
1F：推 aggaci:我猜是醋酸没洗乾净，因为银染也是这样！ 03/23 20:40
2F：推 FromWood:请问楼上 是说reduse後要用大量醋酸洗吗 03/24 02:38
3F：→ FromWood:或是说醋酸後要用大量水洗?? 谢谢^^ 03/24 02:39
4F：推 aggaci:洗到完全没醋酸味，多洗几次噜 03/24 15:02
5F：推 datro:Schiff's Stain好像本来就不能久放 要在一定时间内纪录 久了 03/24 23:24
6F：→ datro:就会变成 红吱吱的 老板拿过他以前的胶来看 都马是红的一片 03/24 23:25