作者popoyellow ()
看板Biotech
標題[問題]culture lymphocytes以及splenocytes都養不活>"<
時間Tue Mar 20 21:38:55 2007
我目前在做從spleen以及lymph node取細胞出來culture
我的方法是
1:殺老鼠 取spleen和lymph node
2:用石棉網壓碎兩個organ
3:lymph nodes壓碎後用PBS washx1次後 算4x10五次方/200ul RPMI/96 well中
splenocyes 用RBC lysis bufferx2,PBS washx1,RPMI回溶2X10六次方/24 well中
4:加入IL2以及anigen activate (IL2:20 units antigen 10ug/ml)
5:culture 5天後收
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我的問題是5天後細胞要收時在顯微鏡下都不亮了 剩沒幾顆亮的
但是我學長說他的細胞做起來比seeding下去時還要多
也就是細胞有被activate起來
想請問板上的前輩 我的方法是哪邊有錯誤了 細胞種太多 還是太少
IL2以及 antigen量的多寡 細胞都不能成功prolifferation實在很煩
這個問題困擾我好久了>< 希望板上有做過類似實驗的前輩可以指點一下~
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◆ From: 140.116.61.167
1F：推 dlink:細胞會不會太擠 03/20 22:45
2F：推 hunnan:我們實驗室的經驗是細胞量不要超過2X10^6 / ml medium 03/21 10:32
3F：→ hunnan:還有你的細胞有沒有activation也有差 03/21 10:32