作者popoyellow ()
看板Biotech
标题[问题]culture lymphocytes以及splenocytes都养不活>"<
时间Tue Mar 20 21:38:55 2007
我目前在做从spleen以及lymph node取细胞出来culture
我的方法是
1:杀老鼠 取spleen和lymph node
2:用石棉网压碎两个organ
3:lymph nodes压碎後用PBS washx1次後 算4x10五次方/200ul RPMI/96 well中
splenocyes 用RBC lysis bufferx2,PBS washx1,RPMI回溶2X10六次方/24 well中
4:加入IL2以及anigen activate (IL2:20 units antigen 10ug/ml)
5:culture 5天後收
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我的问题是5天後细胞要收时在显微镜下都不亮了 剩没几颗亮的
但是我学长说他的细胞做起来比seeding下去时还要多
也就是细胞有被activate起来
想请问板上的前辈 我的方法是哪边有错误了 细胞种太多 还是太少
IL2以及 antigen量的多寡 细胞都不能成功prolifferation实在很烦
这个问题困扰我好久了>< 希望板上有做过类似实验的前辈可以指点一下~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.61.167
1F：推 dlink:细胞会不会太挤 03/20 22:45
2F：推 hunnan:我们实验室的经验是细胞量不要超过2X10^6 / ml medium 03/21 10:32
3F：→ hunnan:还有你的细胞有没有activation也有差 03/21 10:32