作者shuo218 (快樂的理由)
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標題[求救] 抽pasmid的量都好少
時間Thu Dec 14 13:06:51 2006
最近在抽plasmid 因為我們實驗室是第一次接觸細菌的實驗
雖然照protocol下去做 可是抽完的濃度都少的可以
下面是我的protocol 還麻煩大家可以幫我解決這個問題
1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube)
Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm
一次培養2管，然後將兩管倒在一起成20ml
Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min
接下來的步驟都是照promega的protocol做的
不過最後我們是用40ul回溶 因為上次用100ul覺得量太少
結果今天做出來量更少 大概只有0.0125 ug/ul
實在不知道是哪邊出問題
因為後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli
可是前面的量就很少 後面好像根本就沒辦法做下去
大家有什麼好的方法嗎?謝謝!!
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◆ From: 140.128.64.211
1F：推 pwl:養菌的轉速滿低的.我大概都用到180.養好的菌液應該是不透光的 12/14 16:19
2F：→ pwl:通常用1cc的菌液就可以抽到1ug/ul以上的質體（溶於50ul的水） 12/14 16:21
3F：→ pwl:我是用自己配的son.123抽的.用kit抽效率應該會更高 12/14 16:24
4F：→ pwl:20ml的菌液大概要分成10個tube以上來作.如果接下來是做ligatio 12/14 16:26
5F：→ pwl:的話.大概用3ml的菌液就夠了. 12/14 16:28