作者shuo218 (快乐的理由)
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标题[求救] 抽pasmid的量都好少
时间Thu Dec 14 13:06:51 2006
最近在抽plasmid 因为我们实验室是第一次接触细菌的实验
虽然照protocol下去做 可是抽完的浓度都少的可以
下面是我的protocol 还麻烦大家可以帮我解决这个问题
1 colony of successfully pGL-transformed E.Coli to 10ml prewarmed LB+ (in tube)
Incubate o/n (16H) 37°C 60rpm
一次培养2管，然後将两管倒在一起成20ml
Centrifuge the 20ml culture at 10,000g x 5min
接下来的步骤都是照promega的protocol做的
不过最後我们是用40ul回溶 因为上次用100ul觉得量太少
结果今天做出来量更少 大概只有0.0125 ug/ul
实在不知道是哪边出问题
因为後面要切 然後ligase 回收 再送到E.coli
可是前面的量就很少 後面好像根本就没办法做下去
大家有什麽好的方法吗?谢谢!!
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◆ From: 140.128.64.211
1F：推 pwl:养菌的转速满低的.我大概都用到180.养好的菌液应该是不透光的 12/14 16:19
2F：→ pwl:通常用1cc的菌液就可以抽到1ug/ul以上的质体（溶於50ul的水） 12/14 16:21
3F：→ pwl:我是用自己配的son.123抽的.用kit抽效率应该会更高 12/14 16:24
4F：→ pwl:20ml的菌液大概要分成10个tube以上来作.如果接下来是做ligatio 12/14 16:26
5F：→ pwl:的话.大概用3ml的菌液就够了. 12/14 16:28