Flow Cytometer的結果是"相對"的 你會需要先用negative control設好"negative" 然後用positive controls/compensation cotrls 設FITC only和PE only的signal 稍微詳細的步驟如下: 1. 在work sheet 上畫一個"aquisition" dot plot (FACS的軟體 CellQuest把圖分兩種 Analysis和Aquisition 用Aqusition mode收集data, Analysis mode把data叫出來分析) 2.叫出Amp/Detector控制板 (Cytometer->Amp/Detector) 記得把FITC(FL1)和PE(FL2) channel選為Log mode (螢光強度一般用Log scale) 3. 上negative control 設negative signal Cytometer->Amp/Detector 調Amp把所有的細胞點都設在你要的地方 一般大家都是把negative 設在0和10^1之間 記得要調FITC的也要調PE的 4. 叫出compensation控制板 Cytometer->Compensation 5. 上compensation control (1) FITC only- 應該只會出現在第二象限(FITC pos only)的細胞點 出現在第一象限(FITC and PE double pos) 調FL2- %FL1 --視螢光強度而定 FACS一般是18%-26% (2) PE only 應該只會出現在第四象限(PE pos only)的細胞點 出現在第一象限(比較靠近第四象限的地方) 調FL-1- %FL2 --FACS一般是0.8%-1.2% -把false "double positive"的訊號調為single positive就可以了 千萬不要把細胞點壓得太低(細胞點不要貼到軸上) 6. 調完所有control，設定就不能動了 這時候你就可以看你真的要分析的樣本 -google 一下 Purdue的Flow cytometer 我覺得他們的討論版還不錯，可惜我是在學會Flow才發現這個版 -可以翻一下current protocol in immunology和 current protocol in flow cytometer -四象限區分其實很簡單 看過一次就很難忘記 所以只要你找一個有經驗的人帶你上機 一定可以學到 (FACS是貴重儀器，要使用的人應該都要受過訓練 如果你問，帶你的人一定會示範) -在看螢光強度前，要記得用FSC vs SSC 把細胞和死細胞碎片分出來 -我一般習慣另外用PI區分死細胞和活細胞，只看活細胞的螢光強度 並不是每個實驗室都會這麼做，可是強力推薦 everblue --

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