Flow Cytometer的结果是"相对"的 你会需要先用negative control设好"negative" 然後用positive controls/compensation cotrls 设FITC only和PE only的signal 稍微详细的步骤如下: 1. 在work sheet 上画一个"aquisition" dot plot (FACS的软体 CellQuest把图分两种 Analysis和Aquisition 用Aqusition mode收集data, Analysis mode把data叫出来分析) 2.叫出Amp/Detector控制板 (Cytometer->Amp/Detector) 记得把FITC(FL1)和PE(FL2) channel选为Log mode (萤光强度一般用Log scale) 3. 上negative control 设negative signal Cytometer->Amp/Detector 调Amp把所有的细胞点都设在你要的地方 一般大家都是把negative 设在0和10^1之间 记得要调FITC的也要调PE的 4. 叫出compensation控制板 Cytometer->Compensation 5. 上compensation control (1) FITC only- 应该只会出现在第二象限(FITC pos only)的细胞点 出现在第一象限(FITC and PE double pos) 调FL2- %FL1 --视萤光强度而定 FACS一般是18%-26% (2) PE only 应该只会出现在第四象限(PE pos only)的细胞点 出现在第一象限(比较靠近第四象限的地方) 调FL-1- %FL2 --FACS一般是0.8%-1.2% -把false "double positive"的讯号调为single positive就可以了 千万不要把细胞点压得太低(细胞点不要贴到轴上) 6. 调完所有control，设定就不能动了 这时候你就可以看你真的要分析的样本 -google 一下 Purdue的Flow cytometer 我觉得他们的讨论版还不错，可惜我是在学会Flow才发现这个版 -可以翻一下current protocol in immunology和 current protocol in flow cytometer -四象限区分其实很简单 看过一次就很难忘记 所以只要你找一个有经验的人带你上机 一定可以学到 (FACS是贵重仪器，要使用的人应该都要受过训练 如果你问，带你的人一定会示范) -在看萤光强度前，要记得用FSC vs SSC 把细胞和死细胞碎片分出来 -我一般习惯另外用PI区分死细胞和活细胞，只看活细胞的萤光强度 并不是每个实验室都会这麽做，可是强力推荐 everblue --

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