FACS是最陽春的流式細胞儀 不過如果你是新手，建議你找個人幫你看看所有的設定有沒有問題 我假設你有人可以幫你操作機器，幫你找到細胞群 (有很多新手一開始完全不知道自己到底在看什麼，細胞到底在哪裡) 以下是你需要準備的sample 1. neg ctrl- 最理想的negative control是isotype control 也就是由同一種動物得到的同一類抗體，但是並沒有抗原專一性 主要是測non-specific binding的background 舉例說明，如果你用的抗體是 Rat anti-mouse CD4-FITC, IgG2a kappa chain 它的isotype control就是 Rat anti-mouse IgG2a, Kappa-FITC (BD Pharmigen, Cat No. 554688) 同樣的，你也會需要另外一支 PE-conjugated isotype control 當作 Rat anti-mouse CD25-PE 2. compensation controls (1) FITC only (2) PE only FITC and PE的emmission會overlap,沒有經過校正， single positive的訊號會被誤讀為double positive 要做這種校正 你需要只染單一顏色的樣本(一管樣本只有一個顏色) 通常我們都會找細胞一定會表現的表面抗原作這種control 譬如說你做的是T細胞 你可以用 (1) CD4-FITC (2) CD4-PE 這種control不但可以用來做compensation 可以讓你知道你的染色過程有沒有問題 3. 你的real sample -染上CD4-FITC加CD25-PE 至於怎麼做四象限區分(qua-plot)，下一篇再說好了 我不喜歡念洛洛長的文章 everblue ※ 引述《[email protected] (創造自己的世界)》之銘言： : 最近要看CD4+CD25+T cell 的表現量 : 一個是染FITC 另一個染PE : 請問有哪位大大有這種三色螢光染色 ( 流式細胞儀 ）的作法呢 ? : 因為我們家我算第一個作這種T 細胞亞群, 所以完全不行 : 要是有哪位高手家是用 BD的 FACS : 也麻煩請您指導一下怎麼使用四象限區分 orz : 都要畢業了才給我出難題的老闆 ...orz --

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