FACS是最阳春的流式细胞仪 不过如果你是新手，建议你找个人帮你看看所有的设定有没有问题 我假设你有人可以帮你操作机器，帮你找到细胞群 (有很多新手一开始完全不知道自己到底在看什麽，细胞到底在哪里) 以下是你需要准备的sample 1. neg ctrl- 最理想的negative control是isotype control 也就是由同一种动物得到的同一类抗体，但是并没有抗原专一性 主要是测non-specific binding的background 举例说明，如果你用的抗体是 Rat anti-mouse CD4-FITC, IgG2a kappa chain 它的isotype control就是 Rat anti-mouse IgG2a, Kappa-FITC (BD Pharmigen, Cat No. 554688) 同样的，你也会需要另外一支 PE-conjugated isotype control 当作 Rat anti-mouse CD25-PE 2. compensation controls (1) FITC only (2) PE only FITC and PE的emmission会overlap,没有经过校正， single positive的讯号会被误读为double positive 要做这种校正 你需要只染单一颜色的样本(一管样本只有一个颜色) 通常我们都会找细胞一定会表现的表面抗原作这种control 譬如说你做的是T细胞 你可以用 (1) CD4-FITC (2) CD4-PE 这种control不但可以用来做compensation 可以让你知道你的染色过程有没有问题 3. 你的real sample -染上CD4-FITC加CD25-PE 至於怎麽做四象限区分(qua-plot)，下一篇再说好了 我不喜欢念洛洛长的文章 everblue ※ 引述《[email protected] (创造自己的世界)》之铭言： : 最近要看CD4+CD25+T cell 的表现量 : 一个是染FITC 另一个染PE : 请问有哪位大大有这种三色萤光染色 ( 流式细胞仪 ）的作法呢 ? : 因为我们家我算第一个作这种T 细胞亚群, 所以完全不行 : 要是有哪位高手家是用 BD的 FACS : 也麻烦请您指导一下怎麽使用四象限区分 orz : 都要毕业了才给我出难题的老板 ...orz --

※ 发信站: 批踢踢参(ptt3.cc) ◆ From: 67.10.241.33