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標 題Re: [問題] mouse tissue RNA
發信站不良牛牧場 (Wed Apr 19 13:32:34 2006)
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※ 引述《[email protected] (上邪)》之銘言：
: 有人利用Trizol抽過老鼠tissue RNA嗎
: 我是先作thymus和spleen這兩種tissue
: 先把organ磨碎取得suspension cell
: 之後再把cell離心下來用Trizol lyse
: 第一次有先算細胞1ml Trizol / 10^7cell
: 結果沉澱完沒有pellet完全沒有東西
: 第二次提高濃度1ml Trizol / 4x10^7
: 沉澱完有看到小小的pellet 溶到15ul的DEPC-H20
: 測量濃度以後發現rna超少的
: total大概只有2ug-5ug
: 跑個小gel幾乎也都用完
: 後來發現RNA degrade的很嚴重
: smear很嚴重 28s和12s的signal弱弱的比例也不正常
: 之後還要作northern blot
: 這樣的量真的是超級少的吧 T_T
: 想請問大家..
: (1) tissue RNA的抽法有什麼比較需要注意的嗎
: (2) 又哪裡可以找到一般mouse tissue抽出來RNA的量"應該"多少的資訊
你要把tissue放在Trizol裡,直接均質磨碎
在Trizol裡,RNA就不會被digest囉
不要先磨碎,這樣RNA都被digest
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1F：推 AcSn:嗯嗯..我們實驗室也都是加了trizol才均質的.. 04/19 22:45
2F：→ AcSn:想請問原發問者為何要先把細胞離下來呀?這樣子感覺不會很方便 04/19 22:46