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标 题Re: [问题] mouse tissue RNA
发信站不良牛牧场 (Wed Apr 19 13:32:34 2006)
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※ 引述《[email protected] (上邪)》之铭言：
: 有人利用Trizol抽过老鼠tissue RNA吗
: 我是先作thymus和spleen这两种tissue
: 先把organ磨碎取得suspension cell
: 之後再把cell离心下来用Trizol lyse
: 第一次有先算细胞1ml Trizol / 10^7cell
: 结果沉淀完没有pellet完全没有东西
: 第二次提高浓度1ml Trizol / 4x10^7
: 沉淀完有看到小小的pellet 溶到15ul的DEPC-H20
: 测量浓度以後发现rna超少的
: total大概只有2ug-5ug
: 跑个小gel几乎也都用完
: 後来发现RNA degrade的很严重
: smear很严重 28s和12s的signal弱弱的比例也不正常
: 之後还要作northern blot
: 这样的量真的是超级少的吧 T_T
: 想请问大家..
: (1) tissue RNA的抽法有什麽比较需要注意的吗
: (2) 又哪里可以找到一般mouse tissue抽出来RNA的量"应该"多少的资讯
你要把tissue放在Trizol里,直接均质磨碎
在Trizol里,RNA就不会被digest罗
不要先磨碎,这样RNA都被digest
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1F：推 AcSn:嗯嗯..我们实验室也都是加了trizol才均质的.. 04/19 22:45
2F：→ AcSn:想请问原发问者为何要先把细胞离下来呀?这样子感觉不会很方便 04/19 22:46