作者chiasaiqueen (其實是水桶腰)
看板Biotech
標題[問題] 我的plate讓我很像cloning菜鳥…
時間Mon Mar 27 02:25:42 2006
做cloning做那麼久了，第一次覺得自己像個什麼都不知道的菜鳥…
事情是這樣的，我做subcloning，直接拿ligation reaction去transform,
用的是DH5a, heat-shock 2 min, recover 50 min,
長在LB/ampicillin plate(100 ug/ml)上，
過了20小時(是的，有點久…我認錯…)去收，
結果發現plate上很多colony都一大坨 水水的，
以前有一次做TA cloning也這樣(那時是16小時去收)，
不過那次有做藍白篩選，所以我挑看起來長得像colony的東西去養、去切，
6顆裡面有4顆是對的…
重點是，
如果是incubate太久，不是都會有satellite現象嗎?
這樣子"水水的"的現象是什麼造成的?
是plate太濕嗎?(我在plating之前有在hood開一點點吹個十分鐘)
感謝版上達人解惑~
有圖有真相：
http://www.wretch.cc/album/blackhottie
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.91.49
1F：推 blence:看似操作過程或工具污染到帶有抗性的菌?如果沾點糊狀物重塗 03/27 02:42
2F：→ blence:以serial dilution挑出single clone檢查如何？ 03/27 02:49
3F：→ blence:這好像把已搖O/N的菌液噴在plate上，再放O/N後長出來的感覺 03/27 02:53
4F：推 chiasaiqueen:TA那次挑糊"小一點"的有insert，但大糊就沒有長； 03/27 03:06
5F：→ chiasaiqueen:有人說這可能是有些colony很快消耗biotics造成。 03/27 03:07
6F：推 blence:如果是以上原因,那如何解釋分佈不均？恰巧plate amp不均或 03/27 03:22
7F：→ blence:塗菌液無混合均勻? 通常satellite被挑起很難搖到混濁,所以 03/27 03:24
8F：→ blence:這似乎與目前情況不相似 (忘記說,我plate太濕也沒出現這樣) 03/27 03:26
9F：推 qwert0403:塗菌液後 再hood 吹15~20 min 就不會水水的 03/28 09:31
10F：推 Helene:照片看起來像是有汙染到別的菌 03/30 02:10