作者chiasaiqueen (其实是水桶腰)
看板Biotech
标题[问题] 我的plate让我很像cloning菜鸟…
时间Mon Mar 27 02:25:42 2006
做cloning做那麽久了，第一次觉得自己像个什麽都不知道的菜鸟…
事情是这样的，我做subcloning，直接拿ligation reaction去transform,
用的是DH5a, heat-shock 2 min, recover 50 min,
长在LB/ampicillin plate(100 ug/ml)上，
过了20小时(是的，有点久…我认错…)去收，
结果发现plate上很多colony都一大坨 水水的，
以前有一次做TA cloning也这样(那时是16小时去收)，
不过那次有做蓝白筛选，所以我挑看起来长得像colony的东西去养、去切，
6颗里面有4颗是对的…
重点是，
如果是incubate太久，不是都会有satellite现象吗?
这样子"水水的"的现象是什麽造成的?
是plate太湿吗?(我在plating之前有在hood开一点点吹个十分钟)
感谢版上达人解惑~
有图有真相：
http://www.wretch.cc/album/blackhottie
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.137.91.49
1F：推 blence:看似操作过程或工具污染到带有抗性的菌?如果沾点糊状物重涂 03/27 02:42
2F：→ blence:以serial dilution挑出single clone检查如何？ 03/27 02:49
3F：→ blence:这好像把已摇O/N的菌液喷在plate上，再放O/N後长出来的感觉 03/27 02:53
4F：推 chiasaiqueen:TA那次挑糊"小一点"的有insert，但大糊就没有长； 03/27 03:06
5F：→ chiasaiqueen:有人说这可能是有些colony很快消耗biotics造成。 03/27 03:07
6F：推 blence:如果是以上原因,那如何解释分布不均？恰巧plate amp不均或 03/27 03:22
7F：→ blence:涂菌液无混合均匀? 通常satellite被挑起很难摇到混浊,所以 03/27 03:24
8F：→ blence:这似乎与目前情况不相似 (忘记说,我plate太湿也没出现这样) 03/27 03:26
9F：推 qwert0403:涂菌液後 再hood 吹15~20 min 就不会水水的 03/28 09:31
10F：推 Helene:照片看起来像是有污染到别的菌 03/30 02:10