作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
標題Re: 請問用enterokinase切fusion protein的問題
時間Mon Mar 13 23:23:58 2006
※ 引述《dorphilvet ( )》之銘言：
: ※ 引述《aggaci (好想學鋼琴阿!(學陶笛中))》之銘言：
: : enterokinase非常難用
: : 你確定要用嗎?
: 就是很不想用，所以才問有沒有其他的方法…
: 難道只有enterokinase可以切pet的fusion protein嗎?
: 大家有其他的方法嗎?
: 感謝回答^^
enterokinase超貴，而且很難操作
當初構clone的時候沒有考慮到這個問題嗎?
小弟直覺只有用enterokinase切了
不然就重新構clone然後重收蛋白吧
pET32的空載體就會自動放一個16 kD大小的蛋白了
前面有s-tag和兩邊的Hisx6幫助純化外
另外就是有thioredoxin可以幫助形成soluble form
另外有一個很爛的招式
就是拿BL21(DE3)pET32用IPTG誘導後的crude extract
跟拿到的antibody做adsorption
看看能不能把你的poly-Ab裡面會認空pET32的部分吸附掉
不過這樣的效率很差，不建議
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