作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
标题Re: 请问用enterokinase切fusion protein的问题
时间Mon Mar 13 23:23:58 2006
※ 引述《dorphilvet ( )》之铭言：
: ※ 引述《aggaci (好想学钢琴阿!(学陶笛中))》之铭言：
: : enterokinase非常难用
: : 你确定要用吗?
: 就是很不想用，所以才问有没有其他的方法…
: 难道只有enterokinase可以切pet的fusion protein吗?
: 大家有其他的方法吗?
: 感谢回答^^
enterokinase超贵，而且很难操作
当初构clone的时候没有考虑到这个问题吗?
小弟直觉只有用enterokinase切了
不然就重新构clone然後重收蛋白吧
pET32的空载体就会自动放一个16 kD大小的蛋白了
前面有s-tag和两边的Hisx6帮助纯化外
另外就是有thioredoxin可以帮助形成soluble form
另外有一个很烂的招式
就是拿BL21(DE3)pET32用IPTG诱导後的crude extract
跟拿到的antibody做adsorption
看看能不能把你的poly-Ab里面会认空pET32的部分吸附掉
不过这样的效率很差，不建议
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