我現在在實驗室打工，然後會常常碰到要幫學長姐抽質體DNA的工作 一般的菌還好，可是每次我遇到一種叫VSVG的質體就完了 產率相當的低，每次可能都要多弄好幾罐才能抽夠 我現在是在作大量質體的製備，利用廠商設計好的工具說明來抽。 現在就我所學的，想到的只有一些原因 本身質體就很不容易被transformation到大腸桿菌裡，因為比較大 本身VSVG的copy number數低(這是實驗室的學長姐跟我說的) 想找尋一些對付這種low copy的質體DNA，我把一些學長姐提供的意見與自己的愚笨 想法一起貼上來，希望大家能給點意見討論討論>"< 學長姐的建議： ‧多養一些菌，在lysis buffer裡面放比較久一點 ‧盡可能的小心.... ‧如果覺得很煩那就retransformation囉！因為可能當時的competent cell不夠好 ‧抽dna加isopropanol後，丟到-80 o/n，第二天再去抽 我的一些想法： ‧把菌養久一點，例如說我今天養500ml的菌，10小時後去抽。那我把養的時間加長 變成18或24小時之後再去抽，會不會比較好？或會更糟？ 通常大家對這些細菌大約都養多久，或去測OD600時大約在多少左右是一個可能得到 較多的量？ 我其實很擔心這樣菌會不會活太老然後就像做competent cell一樣 失敗 ‧不用過column的技術，用傳統的酒精沉澱法去做，據說這樣可能盡可能的減低DNA黏 在column上的機會。不過這個傳統技術有什麼先天限制嗎？ ‧用更高的轉速轉DNA：這有用嗎？我是以抽病毒的方法去想的，想把病毒弄下來就是 要轉快一點... 我觀察一些菌的生長情形，像我們養的VSVG跟其他比較high copy的菌，總覺得它雖 然用同樣的時間去養，可是就是感覺混濁度就比其他的菌低一些，有時還覺得它好像都 沒長一樣，跟昨天放下去的LB顏色差不多XD ↑有時候上面的天馬行空版思考學長姐都覺得不太可能，可是...還是來問一下 大概就是這樣了....板上的前輩謝謝你們看文章 如果前輩覺得這些資訊是可以自修被查到的 那可否提供大概的方向，要往哪裡去找會比較好 我想我可以去看看，然後再把不懂的東西提出 總之謝謝各位 --

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