我现在在实验室打工，然後会常常碰到要帮学长姐抽质体DNA的工作 一般的菌还好，可是每次我遇到一种叫VSVG的质体就完了 产率相当的低，每次可能都要多弄好几罐才能抽够 我现在是在作大量质体的制备，利用厂商设计好的工具说明来抽。 现在就我所学的，想到的只有一些原因 本身质体就很不容易被transformation到大肠杆菌里，因为比较大 本身VSVG的copy number数低(这是实验室的学长姐跟我说的) 想找寻一些对付这种low copy的质体DNA，我把一些学长姐提供的意见与自己的愚笨 想法一起贴上来，希望大家能给点意见讨论讨论>"< 学长姐的建议： ‧多养一些菌，在lysis buffer里面放比较久一点 ‧尽可能的小心.... ‧如果觉得很烦那就retransformation罗！因为可能当时的competent cell不够好 ‧抽dna加isopropanol後，丢到-80 o/n，第二天再去抽 我的一些想法： ‧把菌养久一点，例如说我今天养500ml的菌，10小时後去抽。那我把养的时间加长 变成18或24小时之後再去抽，会不会比较好？或会更糟？ 通常大家对这些细菌大约都养多久，或去测OD600时大约在多少左右是一个可能得到 较多的量？ 我其实很担心这样菌会不会活太老然後就像做competent cell一样 失败 ‧不用过column的技术，用传统的酒精沉淀法去做，据说这样可能尽可能的减低DNA黏 在column上的机会。不过这个传统技术有什麽先天限制吗？ ‧用更高的转速转DNA：这有用吗？我是以抽病毒的方法去想的，想把病毒弄下来就是 要转快一点... 我观察一些菌的生长情形，像我们养的VSVG跟其他比较high copy的菌，总觉得它虽 然用同样的时间去养，可是就是感觉混浊度就比其他的菌低一些，有时还觉得它好像都 没长一样，跟昨天放下去的LB颜色差不多XD ↑有时候上面的天马行空版思考学长姐都觉得不太可能，可是...还是来问一下 大概就是这样了....板上的前辈谢谢你们看文章 如果前辈觉得这些资讯是可以自修被查到的 那可否提供大概的方向，要往哪里去找会比较好 我想我可以去看看，然後再把不懂的东西提出 总之谢谢各位 --

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