作者enisx (Tuor Oronar)
看板Biotech
標題Re: [問題] 請問EAS
時間Tue Oct 26 19:37:28 2004
※ 引述《lovesb (等待在十字路口  I》之銘言:
: 最近看paper看到一個以flow的原理為基礎的實驗方法
: EAS: Enzymatic amprification staining
: 可用來amprifyㄧ些表現量低的分子的訊號 以利我們detect
: 但是看了paer中的內文
: 他們是在Ab上接上biotin,再用conjugate PE的streptavidin
: 但是我不太明白這樣的過程中是在哪個步驟可以放大訊息呢^^?
: 我找了當初提出這個方法的original paper
: Cytometry 40:81–85 (2000)
: 有看卻一整個沒有懂阿@@~
: 不知道有沒有了解這個實驗方法的大大可以解惑呢
: 謝謝呢^^
這篇文章在MATERIALS AND METHODS的部分有提及
他將實驗分成兩組
一開始將細胞利用biotinylated的單株抗體去辨認
接著分成
1.以傳統的方式 用streptavidin conjugated FITC 或PE (orCY3)
(因biotin和streptavidin有很強之結合力) 接著作FACS
2.利用TAS (Tyramide Signal Amplification)的原理
您可參考:
http://www.blossombio.com.tw/Products/TSA.html
or
http://www.blossombio.com.tw/PDF/Products/TSA%20Priciple.pdf
這同樣是運用biotin和streptavidin之間的結合力,而streptavidin又能再
和另三個biotin結合,此三個biotin另外各自接上酵素(HRP)
經TAS放大後 再用streptavidin conjugated FITC 或PE (orCY3)
可以得到較好的結果!!
這篇paper是在證明後者比前者好
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◆ From: 140.112.25.191
1F:推 lovesb:謝謝你呢^^ 我研究一下TSA,有問題的話還希 140.112.121.97 10/27
2F:→ lovesb:望能和你多多討論喔*^_________^* 140.112.121.97 10/27
3F:推 enisx:不客氣^^ 140.112.25.191 10/27