※ 引述《tracy9102 (舞飛櫻)》之銘言： : ※ 引述《spye (可愛ㄉ維尼)》之銘言： : : 養菌出現的衛星現象 : : 有誰知道詳細滴原理嗎? : : 只大概知道跟LB plate沒有泡好有關... 你是說 Satellite colony 嗎?.. 那就是抗生素加的不夠 或者是 plate 放太久了 或者是當初加抗生素時根本沒混均勻 將重組 DNA transform 到competent cell 後 有轉入目標基因的 因帶有抗 antibiotic 的 gene 故會生長 但注意 這不代表其他沒轉進目標基因菌都死了 這些很多只是以休眠狀態存在著 以 Amp 這個常用的 antibiotic 來說... 一般市面上的 vector 抗 Amp gene, 其 vector 上會轉譯出一個酵素可以降解 Amp 的 而這個酵素室外泌酵素 也就是說他會使附近的 Amp 逐漸 degrade.. 當附近 medium 的 Amp 被降解後 當初在旁邊休眠的菌 因為沒有了 抗生素的抑制 便開始生長 所以如果是 LB/Amp plate, 放的太久後 目標的 cell 旁邊就會逐漸的長出 衛星菌落 原因即是如此 但是一般而言 Kan 這種 antibiotic 就比較不會有這種問題 因為 vector 抗 Kan 的機制並非是透過 vector 本身轉譯出分解 antibiotic 的外泌酵素, 而是藉由 metabolism 的改變來避開 Kan 的抑制, 故以 Kan 當成抗生素比較不會有這種情況 這種機制作cloning 應該都很清楚 否則再操作更進一步分生實驗的時候 會產生問題 卻不知問題在哪 比如在表現蛋白質的時候 就會遇到表現不出來的情況 : 以我的實驗來說 : 我養的菌若是經過重組後 : 塗於IPTG和X-GAL的LB PLATE上(藍白篩) : 如果出現這種現象 : 是因為你當初重組時的vecter insert DNA : 其中一個或二個處理的不夠乾淨 : DNA中含有太多雜質或蛋白質....等 : 就會有這種情況 : 要解決也滿容易的 : 就多洗幾次~離心的轉速高一些 : (G力要夠 放去大台一點的離心機去離) : 最後酒精洗的時候記得一定要完全乾了才溶於水 : 這樣的話 : 衛星現象會改善非常多 : 給你參考 ^^ : 如有錯誤 請指正 --

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