※ 引述《tracy9102 (舞飞樱)》之铭言： : ※ 引述《spye (可爱ㄉ维尼)》之铭言： : : 养菌出现的卫星现象 : : 有谁知道详细滴原理吗? : : 只大概知道跟LB plate没有泡好有关... 你是说 Satellite colony 吗?.. 那就是抗生素加的不够 或者是 plate 放太久了 或者是当初加抗生素时根本没混均匀 将重组 DNA transform 到competent cell 後 有转入目标基因的 因带有抗 antibiotic 的 gene 故会生长 但注意 这不代表其他没转进目标基因菌都死了 这些很多只是以休眠状态存在着 以 Amp 这个常用的 antibiotic 来说... 一般市面上的 vector 抗 Amp gene, 其 vector 上会转译出一个酵素可以降解 Amp 的 而这个酵素室外泌酵素 也就是说他会使附近的 Amp 逐渐 degrade.. 当附近 medium 的 Amp 被降解後 当初在旁边休眠的菌 因为没有了 抗生素的抑制 便开始生长 所以如果是 LB/Amp plate, 放的太久後 目标的 cell 旁边就会逐渐的长出 卫星菌落 原因即是如此 但是一般而言 Kan 这种 antibiotic 就比较不会有这种问题 因为 vector 抗 Kan 的机制并非是透过 vector 本身转译出分解 antibiotic 的外泌酵素, 而是藉由 metabolism 的改变来避开 Kan 的抑制, 故以 Kan 当成抗生素比较不会有这种情况 这种机制作cloning 应该都很清楚 否则再操作更进一步分生实验的时候 会产生问题 却不知问题在哪 比如在表现蛋白质的时候 就会遇到表现不出来的情况 : 以我的实验来说 : 我养的菌若是经过重组後 : 涂於IPTG和X-GAL的LB PLATE上(蓝白筛) : 如果出现这种现象 : 是因为你当初重组时的vecter insert DNA : 其中一个或二个处理的不够乾净 : DNA中含有太多杂质或蛋白质....等 : 就会有这种情况 : 要解决也满容易的 : 就多洗几次~离心的转速高一些 : (G力要够 放去大台一点的离心机去离) : 最後酒精洗的时候记得一定要完全乾了才溶於水 : 这样的话 : 卫星现象会改善非常多 : 给你参考 ^^ : 如有错误 请指正 --

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