※ 引述《crazyplayer (我可以給你勇氣!!)》之銘言： : 我們老師要叫我做螢光顯微鏡(並非confocal) : 可是 我的細胞不是attached的..所以 根本不可能貼在蓋玻片上 = ="這是困難點之一.. : 但我們老師說 蓋玻片 蓋上去 細胞就動不了了 ...這...???可否大家給我點指示?? 把你的玻片先沾點0.2% genatin即可 我們lab養的K562都是這麼貼的 聽說poly-lycine也可以... : 但好像有種叫作cytospin的方法 可以使susppension的細胞打在載玻片上...對吧!?? : 可是 要打多少細胞上去呢?是200個嗎?? : 但 現在我又有個問題..就是 我到底是要用什麼溶液去固定細胞呢? : 是要用acetone-ethanol (1:1)呢?還是用 100%的純酒精?? fix....我都用2% formadehyde 你說的是permeabilize嗎? : 還是要用2%的parafarmaldehyde..?? : 2.固定完細胞後 需要blocking嗎???我會覺的有問題的原因是confocal不用blocking! : 完全比照wstern blot 3.因為 我要看的蛋白是alpha-tubulin.和beta-tubulin..用是 FITC去看... : 再加藥之後 是否這兩種蛋白有否增加or.減少??? : 我的問題是 ....看這兩種蛋白一定要活細胞 or 死細胞嗎??(因為我考慮到hy抗體的時 : 間，因為如果是活細胞的話 就不用hy太久 如果是死細胞的話就可能hy很久... : 4.因為FITC很容易decay也...hy 完一抗和二抗後...是封片完..想看再看嗎?? : 是阿 如果是..那這樣FITC 會不會decay呀/??是不是一定要在暗房做呀?? 避光即可 : 5.最後 大家有染細胞核 來確定 細胞數的多少嗎?/就是所謂的mounting.?? 有染DAPI --

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