※ 引述《crazyplayer (我可以给你勇气!!)》之铭言： : 我们老师要叫我做萤光显微镜(并非confocal) : 可是 我的细胞不是attached的..所以 根本不可能贴在盖玻片上 = ="这是困难点之一.. : 但我们老师说 盖玻片 盖上去 细胞就动不了了 ...这...???可否大家给我点指示?? 把你的玻片先沾点0.2% genatin即可 我们lab养的K562都是这麽贴的 听说poly-lycine也可以... : 但好像有种叫作cytospin的方法 可以使susppension的细胞打在载玻片上...对吧!?? : 可是 要打多少细胞上去呢?是200个吗?? : 但 现在我又有个问题..就是 我到底是要用什麽溶液去固定细胞呢? : 是要用acetone-ethanol (1:1)呢?还是用 100%的纯酒精?? fix....我都用2% formadehyde 你说的是permeabilize吗? : 还是要用2%的parafarmaldehyde..?? : 2.固定完细胞後 需要blocking吗???我会觉的有问题的原因是confocal不用blocking! : 完全比照wstern blot 3.因为 我要看的蛋白是alpha-tubulin.和beta-tubulin..用是 FITC去看... : 再加药之後 是否这两种蛋白有否增加or.减少??? : 我的问题是 ....看这两种蛋白一定要活细胞 or 死细胞吗??(因为我考虑到hy抗体的时 : 间，因为如果是活细胞的话 就不用hy太久 如果是死细胞的话就可能hy很久... : 4.因为FITC很容易decay也...hy 完一抗和二抗後...是封片完..想看再看吗?? : 是阿 如果是..那这样FITC 会不会decay呀/??是不是一定要在暗房做呀?? 避光即可 : 5.最後 大家有染细胞核 来确定 细胞数的多少吗?/就是所谓的mounting.?? 有染DAPI --

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