顯微注射法 (Microinjection) 是一種利用玻璃毛細管將DNA注入胚胎細胞的技術。 而電破法 (Electroporation) 則是利用瞬間高電壓， 使細胞膜孔隙張大，而DNA則得以進入。 ______________________________________________________________ 顯微注射法 一、毛細管針的製備 拉針--利用重力及加熱金屬環把毛細管從中間拉開， 重力越大，溫度越低，所拉的針越細長； 重力越小，溫度越高，所拉的針越粗短。 拉針的機器可分為兩種：直立式和水平式 直立式所拉的針，上下兩根針的粗細長短會有所差別，受G的影響 水平式所拉的針，左右兩根針則會相同。 可是，一般最常用的還是直立式拉針器， 因為直立式的一台10萬元左右， 水平式的一台起碼30萬元。 磨針--由於拉完針後，針尖端會受熱融合，保持封閉，因此需要利用磨針器來將針尖 磨開。 磨針時可加水流，以避免碎削堵住針尖。 磨的角度越小，或是開口越小，越易刺入卵中；但是相對的容易堵針。 磨的角度越大，或是開口越大，越亦對卵造成傷害；但是相對的不用常常換針。 所以比較好的做法是，盡可能磨小一點，而DNA乾淨一點，針保存乾淨一點。 這是需要花時間去取得最適當的開口的。 有些人會在磨完針後，利用針筒注入礦物油，利用空氣壓縮力大於液體壓縮力的原理， 以求得比較精準的注射量。但是須注意不能有氣泡，否則會在抽取DNA時造成負壓。 也有人是不加入礦物油，但是還是會在水中清洗針頭。 不管用哪一種方式，針頭保持乾淨是一定要的，不然等到你要注射時就會發現連續好多 根針都是堵針的，到時候就哭笑不得了。 附註一點，我記得打老鼠的針不是用磨的，而是用敲開的，這就非常需要技巧了，因為 每次敲開的大小很容易不一樣，需要特別注意。但是我不是注射老鼠的，不是太清楚。 DNA--再來製備DNA就是很簡單的事了，只要注意用水去溶解DNA，以免造成毒性。 還有，切plasmid時，可以切一刀，以便增加插入染色體的機率。在這一部分就屬於轉基 因的原理，在此不多說了。 注射--注射的機器其實有很多種，有氣壓式，油壓式，也有手動式。那是需要花時間去 適應的。 由於我只打過斑馬魚卵，我只敘述斑馬魚卵的打法。 注射時DNA需加入phenol red，這是一種染劑，可以在DNA注射進去時用肉眼看到， 以便確定有注射進去。因為DNA是透明的嘛，如果注射到細胞的部分，是看 不到DNA的。 注射時若是打到卵殼間，DNA會快速擴散，若是打到卵黃囊或是細胞，則會聚集， 慢慢擴散。 注射時多半會打入細胞中，效果較佳。有時也會打入卵黃囊，這是比較好打，但 是通常是打入有毒性物質時。 ------------------------------------------------------------------------ 至於電破法，我沒做過不太清楚。但是我所知通常是電精子，不知道有沒有人電卵的。 ------------------------------------------------------------------------ 以上是我做的一些簡單整理，有錯的，或是不足的歡迎指正。 希望大家能夠踴躍的PO文，讓這個版的內容等級提升。 ------------------------------------------------------------------------ 版主加油!! --

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