显微注射法 (Microinjection) 是一种利用玻璃毛细管将DNA注入胚胎细胞的技术。 而电破法 (Electroporation) 则是利用瞬间高电压， 使细胞膜孔隙张大，而DNA则得以进入。 ______________________________________________________________ 显微注射法 一、毛细管针的制备 拉针--利用重力及加热金属环把毛细管从中间拉开， 重力越大，温度越低，所拉的针越细长； 重力越小，温度越高，所拉的针越粗短。 拉针的机器可分为两种：直立式和水平式 直立式所拉的针，上下两根针的粗细长短会有所差别，受G的影响 水平式所拉的针，左右两根针则会相同。 可是，一般最常用的还是直立式拉针器， 因为直立式的一台10万元左右， 水平式的一台起码30万元。 磨针--由於拉完针後，针尖端会受热融合，保持封闭，因此需要利用磨针器来将针尖 磨开。 磨针时可加水流，以避免碎削堵住针尖。 磨的角度越小，或是开口越小，越易刺入卵中；但是相对的容易堵针。 磨的角度越大，或是开口越大，越亦对卵造成伤害；但是相对的不用常常换针。 所以比较好的做法是，尽可能磨小一点，而DNA乾净一点，针保存乾净一点。 这是需要花时间去取得最适当的开口的。 有些人会在磨完针後，利用针筒注入矿物油，利用空气压缩力大於液体压缩力的原理， 以求得比较精准的注射量。但是须注意不能有气泡，否则会在抽取DNA时造成负压。 也有人是不加入矿物油，但是还是会在水中清洗针头。 不管用哪一种方式，针头保持乾净是一定要的，不然等到你要注射时就会发现连续好多 根针都是堵针的，到时候就哭笑不得了。 附注一点，我记得打老鼠的针不是用磨的，而是用敲开的，这就非常需要技巧了，因为 每次敲开的大小很容易不一样，需要特别注意。但是我不是注射老鼠的，不是太清楚。 DNA--再来制备DNA就是很简单的事了，只要注意用水去溶解DNA，以免造成毒性。 还有，切plasmid时，可以切一刀，以便增加插入染色体的机率。在这一部分就属於转基 因的原理，在此不多说了。 注射--注射的机器其实有很多种，有气压式，油压式，也有手动式。那是需要花时间去 适应的。 由於我只打过斑马鱼卵，我只叙述斑马鱼卵的打法。 注射时DNA需加入phenol red，这是一种染剂，可以在DNA注射进去时用肉眼看到， 以便确定有注射进去。因为DNA是透明的嘛，如果注射到细胞的部分，是看 不到DNA的。 注射时若是打到卵壳间，DNA会快速扩散，若是打到卵黄囊或是细胞，则会聚集， 慢慢扩散。 注射时多半会打入细胞中，效果较佳。有时也会打入卵黄囊，这是比较好打，但 是通常是打入有毒性物质时。 ------------------------------------------------------------------------ 至於电破法，我没做过不太清楚。但是我所知通常是电精子，不知道有没有人电卵的。 ------------------------------------------------------------------------ 以上是我做的一些简单整理，有错的，或是不足的欢迎指正。 希望大家能够踊跃的PO文，让这个版的内容等级提升。 ------------------------------------------------------------------------ 版主加油!! --

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