作者maurice9325 (水色天秤)
看板Biotech
標題[閒聊] 有KD/KO鑑定過的抗體有那幾家呢
時間Fri Oct 27 15:02:11 2023
就是啊，如題，想請問有KD/KO或其他方法鑑定過的抗體有那幾家呢。
相信各位科科偶爾會遇到一個情況，就是買到的抗體很爛，這裡的爛是指認到相似位置的
band，但根本就不是目標蛋白（亂雜交的那種）。
舉例來說，我就曾經發生過我要以WB確認siRNA knockdown的效率，但是A抗體怎麼壓都不
成功，B抗體卻可以看到prorein表現量如QPCR的結果表現量降低。
我也遇過以CRISPR/Cas9 knockout後PCR/gDNA定序確定切掉了，但是C、D抗體一直有壓到
protein band且跟parental 一樣多。直到換了E抗體後才確定確實有成功。
坦白說，市面上這種爛抗體很多，甚至很多知名大廠的抗體也有這種情況，很多還掛牌好
幾家在賣，所以現在在買抗體，都會盡量優先選擇特別標註或是做過KD/KO validate的抗
體，踩雷的機率也低很多。
所以想請問各位的心得與想法。以及想請問有KD/KO或其他方法鑑定過的抗體有那幾家呢
。
我知道Ab牌, gt牌部分比較新的抗體都會標註。
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 101.12.46.124 (臺灣)
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※ 編輯: maurice9325 (101.12.46.124 臺灣), 10/27/2023 15:03:52
1F：→ ampicillin: 小弟才疏學淺，想知道為何C、D抗體就不算成功？ 10/27 15:14
2F：→ maurice9325: 預期心理吧，當然DNA層次確實不見得會100%反應於蛋10/27 16:03
3F：→ maurice9325: 白質層次，這可能要探討機轉了，頭會很痛。但我做過10/27 16:03
4F：→ maurice9325: 好幾次確實是還了抗體後ko的細胞確實沒有表現蛋白。 10/27 16:03
5F：→ maurice9325: *換10/27 16:04
6F：→ blence: CRISPIR切完有很多狀況發生,驗一下WB真的比較保險10/27 20:04
7F：→ blence: 比如說,切掉exon1,結果有exon1b,切掉ATG卻出現inframe ATG 10/27 20:04
8F：→ blence: 或切中間後面exon,結果細胞用的是alternative exon10/27 20:05
9F：→ blence: 只是有一定比例的抗體是用overexpressed lysate確認而已10/27 20:06
10F：→ blence: endogenous看不到或錯認的情況必然會發生 10/27 20:06
11F：→ blence: 不過找一隻可以用在適合需求如IP,IHC,Flow等,還是比有沒有 10/27 20:12
12F：→ blence: KO/KD validation 來的重要10/27 20:12
13F：→ blence: 我認為KO/KD最重要的賣點是買來堵住reviewer的嘴用10/27 20:17
確實CRISPR knockout就是希望能切到沒有protein表現呀。沒認到相對安心很多，不然做
起來心裡都卡卡的。
另我是學做抗體出身的，以前老闆都會掛在嘴邊，不要驗到overexpression的protein就
很爽，要再多方確認。因為對額外大量的外來蛋白產生抗體本來就是理所當然的會認到也
不奇怪，但是這些抗體能不能認到endogenous 才是最重要的。然後針對PTM的抗體，要確
認是不是“真的”又更難了。
※ 編輯: maurice9325 (101.12.46.124 臺灣), 10/28/2023 08:14:10
14F：推 icome: Abcam, Genetex部分抗體有KO data11/02 12:04
15F：→ icome: 沒看到你最後一句…目前大多是單株抗體廠商才會砸資源做KO 11/02 12:06
對呀，我目前只有看到這兩家，所以才會想問問還有沒有候選的，以及大家的意見。好希
望抗體商能跟專門KO賣細胞株或是siRNA的廠商有合作，我覺得對彼此的商品都有更進一
步的保障，增加消費者信心。
※ 編輯: maurice9325 (101.12.46.124 臺灣), 11/02/2023 15:42:46
16F：→ blence: GTX之前有針對沒圖的品項給feedback就能自選一支當贈品 11/03 20:01
17F：→ blence: KO/KD未嘗不可,也不用花大錢,但或許使用者不在意有無驗證 11/03 20:07
給換不囉嗦很好。但是更重要的是實驗時間呀。相對時間錢是小事了，但這就像一直在tr
oubleshooting，身心俱疲。
然後就是，我認為科學上應該要更務實，就像學到的應大膽假設小心求證，但是時間與KP
I帶來的壓力往往導致老闆們甚至自己不能把妥善求證做好，這樣很不好。
最後小抱怨一下，我的經驗gt牌與sc只能賣老鼠抗體牌，這兩家換抗體相對是乾脆的。某
CS大廠與MP大廠麻煩的要死，毛很多然後又很拖，時間耗更久。
※ 編輯: maurice9325 (49.216.28.158 臺灣), 11/04/2023 05:16:54
18F：→ blence: 我指的不是換抗體,而是讓實驗室用KO/KD data換coupon或任 11/04 11:59
19F：→ blence: 選等值抗體當回饋的方式,這無關無效抗體換貨的issue 11/04 12:01
瞭解，看懂了。我覺得這樣有互利的做法很好。我自己是很在意確認結果，畢竟怕給了錯
誤的資訊。
※ 編輯: maurice9325 (49.216.28.158 臺灣), 11/04/2023 13:31:45
20F：推 cjsntu: Abclonal可以參考 11/09 00:49
21F：推 apple23418: 推proteintech 12/08 13:41