作者maurice9325 (水色天秤)
看板Biotech
标题[闲聊] 有KD/KO监定过的抗体有那几家呢
时间Fri Oct 27 15:02:11 2023
就是啊，如题，想请问有KD/KO或其他方法监定过的抗体有那几家呢。
相信各位科科偶尔会遇到一个情况，就是买到的抗体很烂，这里的烂是指认到相似位置的
band，但根本就不是目标蛋白（乱杂交的那种）。
举例来说，我就曾经发生过我要以WB确认siRNA knockdown的效率，但是A抗体怎麽压都不
成功，B抗体却可以看到prorein表现量如QPCR的结果表现量降低。
我也遇过以CRISPR/Cas9 knockout後PCR/gDNA定序确定切掉了，但是C、D抗体一直有压到
protein band且跟parental 一样多。直到换了E抗体後才确定确实有成功。
坦白说，市面上这种烂抗体很多，甚至很多知名大厂的抗体也有这种情况，很多还挂牌好
几家在卖，所以现在在买抗体，都会尽量优先选择特别标注或是做过KD/KO validate的抗
体，踩雷的机率也低很多。
所以想请问各位的心得与想法。以及想请问有KD/KO或其他方法监定过的抗体有那几家呢
。
我知道Ab牌, gt牌部分比较新的抗体都会标注。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 101.12.46.124 (台湾)
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※ 编辑: maurice9325 (101.12.46.124 台湾), 10/27/2023 15:03:52
1F：→ ampicillin: 小弟才疏学浅，想知道为何C、D抗体就不算成功？ 10/27 15:14
2F：→ maurice9325: 预期心理吧，当然DNA层次确实不见得会100%反应於蛋10/27 16:03
3F：→ maurice9325: 白质层次，这可能要探讨机转了，头会很痛。但我做过10/27 16:03
4F：→ maurice9325: 好几次确实是还了抗体後ko的细胞确实没有表现蛋白。 10/27 16:03
5F：→ maurice9325: *换10/27 16:04
6F：→ blence: CRISPIR切完有很多状况发生,验一下WB真的比较保险10/27 20:04
7F：→ blence: 比如说,切掉exon1,结果有exon1b,切掉ATG却出现inframe ATG 10/27 20:04
8F：→ blence: 或切中间後面exon,结果细胞用的是alternative exon10/27 20:05
9F：→ blence: 只是有一定比例的抗体是用overexpressed lysate确认而已10/27 20:06
10F：→ blence: endogenous看不到或错认的情况必然会发生 10/27 20:06
11F：→ blence: 不过找一只可以用在适合需求如IP,IHC,Flow等,还是比有没有 10/27 20:12
12F：→ blence: KO/KD validation 来的重要10/27 20:12
13F：→ blence: 我认为KO/KD最重要的卖点是买来堵住reviewer的嘴用10/27 20:17
确实CRISPR knockout就是希望能切到没有protein表现呀。没认到相对安心很多，不然做
起来心里都卡卡的。
另我是学做抗体出身的，以前老板都会挂在嘴边，不要验到overexpression的protein就
很爽，要再多方确认。因为对额外大量的外来蛋白产生抗体本来就是理所当然的会认到也
不奇怪，但是这些抗体能不能认到endogenous 才是最重要的。然後针对PTM的抗体，要确
认是不是“真的”又更难了。
※ 编辑: maurice9325 (101.12.46.124 台湾), 10/28/2023 08:14:10
14F：推 icome: Abcam, Genetex部分抗体有KO data11/02 12:04
15F：→ icome: 没看到你最後一句…目前大多是单株抗体厂商才会砸资源做KO 11/02 12:06
对呀，我目前只有看到这两家，所以才会想问问还有没有候选的，以及大家的意见。好希
望抗体商能跟专门KO卖细胞株或是siRNA的厂商有合作，我觉得对彼此的商品都有更进一
步的保障，增加消费者信心。
※ 编辑: maurice9325 (101.12.46.124 台湾), 11/02/2023 15:42:46
16F：→ blence: GTX之前有针对没图的品项给feedback就能自选一支当赠品 11/03 20:01
17F：→ blence: KO/KD未尝不可,也不用花大钱,但或许使用者不在意有无验证 11/03 20:07
给换不罗嗦很好。但是更重要的是实验时间呀。相对时间钱是小事了，但这就像一直在tr
oubleshooting，身心俱疲。
然後就是，我认为科学上应该要更务实，就像学到的应大胆假设小心求证，但是时间与KP
I带来的压力往往导致老板们甚至自己不能把妥善求证做好，这样很不好。
最後小抱怨一下，我的经验gt牌与sc只能卖老鼠抗体牌，这两家换抗体相对是乾脆的。某
CS大厂与MP大厂麻烦的要死，毛很多然後又很拖，时间耗更久。
※ 编辑: maurice9325 (49.216.28.158 台湾), 11/04/2023 05:16:54
18F：→ blence: 我指的不是换抗体,而是让实验室用KO/KD data换coupon或任 11/04 11:59
19F：→ blence: 选等值抗体当回馈的方式,这无关无效抗体换货的issue 11/04 12:01
了解，看懂了。我觉得这样有互利的做法很好。我自己是很在意确认结果，毕竟怕给了错
误的资讯。
※ 编辑: maurice9325 (49.216.28.158 台湾), 11/04/2023 13:31:45
20F：推 cjsntu: Abclonal可以参考 11/09 00:49
21F：推 apple23418: 推proteintech 12/08 13:41