作者crystalwu (婧啵)
看板Biotech
標題THP-1誘導發炎體
時間Tue Oct 3 21:26:53 2023
請問板上各位大大有沒有人做過THP-1巨噬細胞發炎誘導?
目前已經有將他分化成巨噬細胞貼盤了 細胞鏡檢狀態沒有太大問題
但以LPS/ATP誘導難以有大量發炎因子產生(目前都只有先測IL-1beta)
現使用 1 ug/mL誘導6小時後添加5 mM ATP培養1小時,是查到相關資料中普遍使用條件
懇求有相關經驗的神人指點一二
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1F:→ NINJA999: 你的檢測方法是什麼?你想看的發炎因子是什麼?你目前 10/05 09:55
2F:→ NINJA999: 的誘導方式是讓細胞進行pyroptosis ,也許細胞死光了也 10/05 09:55
3F:→ NINJA999: 不一定。單純的給LPS應該就可以誘導發炎了 10/05 09:55
4F:→ crystalwu: 目前是以ELISA kit測IL-1beta跟TNF-alpha,確實沒有想過 10/05 13:17
5F:→ crystalwu: 焦亡這方面 我下次試試下LPS就好 10/05 13:17
6F:→ crystalwu: 另外想請教誘導成功是否會在形態上有明顯變化?變成梭 10/05 13:18
7F:→ crystalwu: 形? 10/05 13:18
8F:推 NINJA999: 我自己是用LPS/IFNg誘導細胞變成M1型態,細胞會變的更 10/05 14:14
9F:→ NINJA999: 平更大,反而不會是梭狀。 10/05 14:14
10F:→ crystalwu: 瞭解~請問您的經驗是加了IFN-gamma才成功嗎? 10/05 14:49
11F:→ NINJA999: 我主要是做macrophage的極化,所以給LPS+IFNg, 誘導成M1 10/05 19:31
12F:→ NINJA999: macrophage, 在我的實驗中,NLRP3, IL1b的蛋白質表現 10/05 19:31
13F:→ NINJA999: 都蠻明顯的,另外TNFa, IL6的RNA也都有明顯表現。 10/05 19:31
14F:→ crystalwu: 瞭解感謝!另外我今天看我分化兩天後的細胞 發現有很多 10/06 14:24
15F:→ crystalwu: 空泡產生 可能真的在誘導前就讓細胞死亡了?不知道您會 10/06 14:24
17F:→ crystalwu: g 10/06 14:24
18F:→ NINJA999: 妳的分化條件是什麼呢?我分化之後,沒有像妳那樣的空泡 10/24 12:59
20F:推 b0109135: 我inflammasome也是用LPS/ATP刺激, 依你用il1b ELISA測m 11/07 14:50
21F:→ b0109135: edium中含量看似沒有問題,ATP可以檢查看看有沒有壞,AT 11/07 14:50
22F:→ b0109135: P也可以換成nigericin。給你參考 11/07 14:50
23F:推 surgeon999: 小弟弱弱借問thp1,前3hr LPS(10ng/ml)刺激後1hr Nig 11/13 02:09
24F:→ surgeon999: ericin (20uM)結果WB看inflammasome 相關分子表現都下 11/13 02:09
25F:→ surgeon999: 去,求解~ 11/13 02:09
26F:推 b0109135: 回覆999: 看NLRP3 活化最直接就是去看IL1b 有沒有releas 11/13 16:40
27F:→ b0109135: e(p20),可以做ELISA或是 medium 的TCA沉澱,最近pyrptos 11/13 16:40
28F:→ b0109135: is 蠻夯的看GSDMD切割也行,都是CASP1的下游。 做inflam 11/13 16:40
29F:→ b0109135: asome 活化第一次建議做- -,+-,++(LPS &Nig)的contro 11/13 16:40
30F:→ b0109135: l 檢查。 如果你加LPS 後NLRP3沒有起來 建議加大濃度或 11/13 16:40
31F:→ b0109135: 放久一點。跟你指導老師或老闆多討論才是最重要的。 11/13 16:40
32F:推 surgeon999: 謝樓上大大,事實上我有試過純加LPS是都有起來的(ex: 11/15 14:59
33F:→ surgeon999: IL-1b, NLRP3)但神奇的地方在於加了Nigericin後,訊號 11/15 14:59
34F:→ surgeon999: 是變弱的~ 照理說它是inflammasome 的activator才對 11/15 14:59
35F:→ surgeon999: ,甚至GSDMD沒啥變化Q,那個TCA沈殿似乎蠻有意思從沒 11/15 14:59
36F:→ surgeon999: 想過~想多了解>< BTW ELISA的結果都跟WB一致(IL-1b) 11/15 14:59