作者crystalwu (婧啵)
看板Biotech
标题THP-1诱导发炎体
时间Tue Oct 3 21:26:53 2023
请问板上各位大大有没有人做过THP-1巨噬细胞发炎诱导?
目前已经有将他分化成巨噬细胞贴盘了 细胞镜检状态没有太大问题
但以LPS/ATP诱导难以有大量发炎因子产生(目前都只有先测IL-1beta)
现使用 1 ug/mL诱导6小时後添加5 mM ATP培养1小时,是查到相关资料中普遍使用条件
恳求有相关经验的神人指点一二
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1F:→ NINJA999: 你的检测方法是什麽?你想看的发炎因子是什麽?你目前 10/05 09:55
2F:→ NINJA999: 的诱导方式是让细胞进行pyroptosis ,也许细胞死光了也 10/05 09:55
3F:→ NINJA999: 不一定。单纯的给LPS应该就可以诱导发炎了 10/05 09:55
4F:→ crystalwu: 目前是以ELISA kit测IL-1beta跟TNF-alpha,确实没有想过 10/05 13:17
5F:→ crystalwu: 焦亡这方面 我下次试试下LPS就好 10/05 13:17
6F:→ crystalwu: 另外想请教诱导成功是否会在形态上有明显变化?变成梭 10/05 13:18
7F:→ crystalwu: 形? 10/05 13:18
8F:推 NINJA999: 我自己是用LPS/IFNg诱导细胞变成M1型态,细胞会变的更 10/05 14:14
9F:→ NINJA999: 平更大,反而不会是梭状。 10/05 14:14
10F:→ crystalwu: 了解~请问您的经验是加了IFN-gamma才成功吗? 10/05 14:49
11F:→ NINJA999: 我主要是做macrophage的极化,所以给LPS+IFNg, 诱导成M1 10/05 19:31
12F:→ NINJA999: macrophage, 在我的实验中,NLRP3, IL1b的蛋白质表现 10/05 19:31
13F:→ NINJA999: 都蛮明显的,另外TNFa, IL6的RNA也都有明显表现。 10/05 19:31
14F:→ crystalwu: 了解感谢!另外我今天看我分化两天後的细胞 发现有很多 10/06 14:24
15F:→ crystalwu: 空泡产生 可能真的在诱导前就让细胞死亡了?不知道您会 10/06 14:24
17F:→ crystalwu: g 10/06 14:24
18F:→ NINJA999: 你的分化条件是什麽呢?我分化之後,没有像你那样的空泡 10/24 12:59
20F:推 b0109135: 我inflammasome也是用LPS/ATP刺激, 依你用il1b ELISA测m 11/07 14:50
21F:→ b0109135: edium中含量看似没有问题,ATP可以检查看看有没有坏,AT 11/07 14:50
22F:→ b0109135: P也可以换成nigericin。给你参考 11/07 14:50
23F:推 surgeon999: 小弟弱弱借问thp1,前3hr LPS(10ng/ml)刺激後1hr Nig 11/13 02:09
24F:→ surgeon999: ericin (20uM)结果WB看inflammasome 相关分子表现都下 11/13 02:09
25F:→ surgeon999: 去,求解~ 11/13 02:09
26F:推 b0109135: 回覆999: 看NLRP3 活化最直接就是去看IL1b 有没有releas 11/13 16:40
27F:→ b0109135: e(p20),可以做ELISA或是 medium 的TCA沉淀,最近pyrptos 11/13 16:40
28F:→ b0109135: is 蛮夯的看GSDMD切割也行,都是CASP1的下游。 做inflam 11/13 16:40
29F:→ b0109135: asome 活化第一次建议做- -,+-,++(LPS &Nig)的contro 11/13 16:40
30F:→ b0109135: l 检查。 如果你加LPS 後NLRP3没有起来 建议加大浓度或 11/13 16:40
31F:→ b0109135: 放久一点。跟你指导老师或老板多讨论才是最重要的。 11/13 16:40
32F:推 surgeon999: 谢楼上大大,事实上我有试过纯加LPS是都有起来的(ex: 11/15 14:59
33F:→ surgeon999: IL-1b, NLRP3)但神奇的地方在於加了Nigericin後,讯号 11/15 14:59
34F:→ surgeon999: 是变弱的~ 照理说它是inflammasome 的activator才对 11/15 14:59
35F:→ surgeon999: ,甚至GSDMD没啥变化Q,那个TCA沈殿似乎蛮有意思从没 11/15 14:59
36F:→ surgeon999: 想过~想多了解>< BTW ELISA的结果都跟WB一致(IL-1b) 11/15 14:59