作者hachu911 (*^o^*)
看板Biotech
标题[求救] 小鼠脑冷冻切片
时间Fri Jun 7 10:01:17 2019
尝试几次小鼠脑冷切都出现大量的*小洞*
不知问题到底出在哪
想请大家帮忙看看 谢谢
我不会做灌流
所以就是取脑後至於10%福马林 24h 常温
蔗糖15% （PBS配置）overnight 4度冰箱
蔗糖30% （PBS配置）overnight 4度冰箱
取出擦乾脑，OCT包埋，放在-20切片机里冷冻，切片温度设定-20，厚度10um
另外有些部份的脑组织边缘也是很容易跟OCT分开
一切就出现一条裂缝
导致贴片偶尔也是会摺到 我包埋前都尽量擦乾了
还是有那个步骤需要更改
或是一定需要灌流呢？
破洞问题真的很惨啊 data更本无法用
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.171.19.39 (台湾)
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1559872879.A.D13.html
1F：→ ddlittleq: o/n不代表组织内部已经完全跟糖水是等渗透了，这样的06/07 19:01
2F：→ ddlittleq: 状况去切当然会有冰晶06/07 19:01
我是看脑沉至离心管底才更换的 查文献也都这样
请问如何才能确定脱水？
3F：→ ddlittleq: 然後你采取取出组织後固定，後固定时间需要依照你组织06/07 19:04
4F：→ ddlittleq: 条件去抓，10趴已经很高了还24hr，如果要做IHC，这样06/07 19:04
5F：→ ddlittleq: 的antigen应该会被这样的固定条件影响导致染不到东西吧06/07 19:04
6F：→ ddlittleq: 建议多找先文献或者去抱一下current protocol吧06/07 19:05
※ 编辑: hachu911 (1.171.19.39 台湾), 06/07/2019 20:58:37
7F：推 ddlittleq: 因为原文只写o/n，如果有下沉，切片时不太会有冰晶的 06/07 22:12
8F：→ ddlittleq: 问题，你要不要30%後再丢一次30%，我的经验跟sucrose这 06/07 22:12
9F：→ ddlittleq: 步骤比较有关 06/07 22:12
10F：推 ddlittleq: oct那段，看你的叙述感觉没有问题，我的经验是，如果 06/07 22:17
11F：→ ddlittleq: 有脱落情形，多半跟组织以及oct温度不均有关 06/07 22:17
12F：推 ddlittleq: 如果可以能附一下结果的图吗，或许要看一下那些小洞是 06/07 22:23
13F：→ ddlittleq: 不是冰晶造成 06/07 22:23
14F：推 Devilxxx: 30%泡一个O/N後换新的30%再泡一个O/N看看 06/12 00:33
15F：→ Devilxxx: 10% formalin还是10% PFA?如果是後者的话太高 前者safe 06/12 00:33
16F：→ Devilxxx: 因为10% NBF里面的PFA也是4% 06/12 00:34
17F：推 littleQwQ: 有照片看吗？ 试试提高温度-10～-15度？ 06/13 11:13