作者steve42125 (DrunkenBlue)
看板Biotech
标题[求救] 如何将96 well的medium和wash去除乾净
时间Wed Sep 5 15:59:25 2018
大家好
关於96 well在操作上有些问题希望可以请教
最近在利用96 well做细胞在无血清环境中的耐受能力，
实验是会在96 well内Seeding一定数量的细胞overnight之後，
将medium去除并以PBS wash之後，将实验组换成不含血清的培养基
但是发现每次在去除medium和wash的PBS之後，
在显微镜下都会看到可能有些well内的细胞会突然"空"掉一块
推测可能是用八爪去掉medium时有不小心刮到
我的操作流程基本上是：
会用八爪插上300ul的tip後再插上20ul的tip去吸掉medium
然後取200ul PBS抵着well的边边轻轻加入
再用相同的方式去掉PBS後补回相对应的medium
不知道各位在操作这种要对96 well内细胞去除medium并wash的实验时
有没有什麽技巧能不让细胞有流失
另外想请问在我第一次有先将含血清培养基去乾净的情况下
96 well以"200ul PBS wash一次"有办法将血清去除乾净吗?
希望能得到各位的经验分享
谢谢！
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2F：→ steve42125: 我们家只有8爪QQ 细胞是A549和1299 贴附型的肺癌细胞 09/05 18:11
3F：→ steve42125: *H1299 09/05 18:11
4F：推 lail: 也可以考虑用无血清培养基多清洗几次，一般培养基其实没很贵 09/05 20:08
5F：→ lail: ，血清比较贵 09/05 20:08
6F：→ steve42125: 对耶 Hmm.. 我都没想到这个 谢谢你的建议!! 09/05 21:49
7F：推 jabari: 看来你只能练空中甩盘了 PBS补到200 然後甩乾 不用拍盘 09/05 21:53
8F：→ jabari: 重覆两次必乾净.. 至少我拿MDCK做TICD50这样很OK 没遇过 09/05 21:53
9F：→ jabari: 血清干扰... 问题只在熟练程度而已Orz 09/05 21:53
10F：→ steve42125: 我原本也是想说用这种方式看看XDD 09/05 22:40
11F：→ steve42125: 只是在hood里面感觉不太好操作哈哈 09/05 22:40
12F：→ steve42125: 方便把甩的动作解说的详细一点吗? 09/05 22:41
13F：→ steve42125: 我自己是想说快速反过来向下倒掉液体之後盖在擦手纸上 09/05 22:44
14F：→ steve42125: 把well洞口的液体沾乾 不知道这样O不OK? 09/05 22:44
15F：推 jabari: 拿一个乾净的大petri dish 或大塑胶盆... 倒置之後在空中 09/06 00:48
16F：→ jabari: 向下抖抖抖...震震震 多练几次就熟练了XD 别用擦手纸啊 09/06 00:48
17F：→ jabari: 我待过某lab是用金贝利面纸拿来吸 因为擦手纸脏脏会污染X 09/06 00:48
18F：→ jabari: D 09/06 00:48
19F：→ jabari: 就我经验 pbs越多反而甩得越好越乾XD 09/06 00:49
20F：→ MDCCLXXVI: 你是空边边 还是空中间？ 09/06 01:22
21F：→ steve42125: jabari: 了解了~ 感谢你的分享XD 09/06 09:26
22F：→ steve42125: MDCC:我是会空最外面一圈~ 09/06 09:27