作者zzxc87520 (珼珼)
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标题Re: [求救] H1299肺癌细胞养不起来
时间Fri Jun 1 03:10:59 2018
※ 引述《zzxc87520 (珼珼)》之铭言：
: 大家好
: 目前解冻後的H1299肺癌细胞
: 一直养的不是很理想
: 这边列出步骤跟细胞的状况
: 想知道问题到底出在哪里
: 使用的medium 是 DMEM+sodium pyruvate
: 步骤
: 1.细胞从液态氮取出後立即解冻直接放进medium 中
: medium 我大概是用10-15cc在dish
: 2.确认一下有均匀分布後就直接放进培养箱
: 3.隔天会换medium 大约7-8cc （会用PBS清洗）
: 细胞状况
: 1.贴壁的情况不是很好，有很多细胞会飘起来。
: 2.本以为是可能原本细胞冻太稀，所以後来是用
: 6公分的dish把细胞液分两盘养，medium 是4-5cc,再加0.5cc细胞液，但情况差不多，有贴但也很飘，可是medium 没有变色也没有混浊。
: 6公分的dish把细胞液分两盘养，medium 是4-5cc,再加0.5cc细胞液，但情况差不多，有贴但也很飘，可是medium 没有变色也没有混浊。
: 3.解冻的隔天我会看一下细胞的状况，但常常看到有一点一点的黑色碎屑在细胞旁边，不太确定是什麽东西，仔细看会感觉有在跳动，晃动dish的时候碎屑不太会移动。
: 4.H1299听学姊描述是会展开有点像神经细胞的样子，会有角的，我解的细胞有展开但很多都是圆圆的，但不是全部都会飘。
: 4.H1299听学姊描述是会展开有点像神经细胞的样子，会有角的，我解的细胞有展开但很多都是圆圆的，但不是全部都会飘。
: 之前解冻第一管没长好
: 我後来看medium中有白色的漂浮物
: 所以有换过medium
: 解第二管的时候情况也没有好转
: 解第二管的时候情况也没有好转
: 所以我觉得不是medium的问题
: （我有test新的medium 但没有长东西）
: 可是每次隔天看细胞都还是有黑色碎屑
: 我不确定是污染还是寄生虫
: 或是只是代谢物
: 手法的部分，我觉得我满轻巧的
: 都是吸出後直接加进medium 里
: 而且还是轻轻的注入
: 如果是冻管本身的问题我该如何处理好呢
: 我已经解了大概4管都长不起来
: 我已经解了大概4管都长不起来
: 我也不太动他怕他长不好
: 大概两天看一次
: 学姊说他之前有养成功
: 让我更挫折
: 我找不到原因在哪里害我很慌张
: 我有养另一株肺癌细胞A549
: 我有养另一株肺癌细胞A549
: 这株学姊说比较好养叫我先做这株
: 养的也蛮顺利的已经culture 很多代了
: 但对H1299始终没有办法
: 请大家救救我感谢大家
先前有在板上询问过H1299的问题
但没办法用留言回覆各位
所以再发一篇，也跟大家讲一下目前的情况
後来我有尝试把DMSO去除，细胞就有贴附了
而且型态蛮漂亮正常的
但是遇到另一个问题
细胞不会长
感觉上就是没有在增生
然後就慢慢的死掉了
我本来以为是可能要给他点时间
所以我每天可能打开培养箱看一下
如果培养液的培养液的颜色没有改变
我就也不会动他
我就也不会动他
第三天会换培养液
细胞不会飘很多起来
但就是很明显的没有在长
然後慢慢的细胞越来越少
後来可能我操作上有问题不小心污染了
我就丢掉了
之後跟学长求救
学长也是一样的情形
但学长是刚解冻後正常生长
但继代一次之後细胞就不贴壁了
各位觉得会是什麽问题呢
我其实没有头绪
也想不太出来到底是哪里出问题
冻管都是一样的没有道理学姊养的起来
但学姊不太想帮我养细胞
所以目前还没有麻烦他
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 1.200.49.239
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1527793861.A.659.html
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1F：推 tynse71864: 我家冻坏的 MEF也是这样 QQ06/01 08:27
2F：推 qiet: 看ATCC是用RPMI1640在养的 看要不要试试 但我觉得是冻坏了06/01 09:34
3F：→ qiet: 难道没有细胞刚买来第一批的冻管可以解吗06/01 09:35
我们家这株细胞是跟其他实验室要的，我试试看能不能再要到一批，但真的很希望不是冻坏啊啊啊啊啊
※ 编辑: zzxc87520 (1.200.49.239), 06/01/2018 10:58:52
4F：→ Sylvaine: 觉得1. 可以考虑换用RPMI养2. 做好重新要一批的心理准 06/02 21:46
5F：→ Sylvaine: 备。当然也可以不死心继续解其他冻管直到OK或耗尽为止 06/02 21:46
6F：→ Sylvaine: 。学姊之前养得起来不代表现在一定也养得起来，尤其是 06/02 21:46
7F：→ Sylvaine: 你们又是拿後来冻的，状况早就不同了。 06/02 21:46
8F：推 MIWAKO2014: 用RPMI养。 06/03 14:20
9F：推 Medical: 觉得冻坏的........ 06/03 22:49
10F：推 joseph103331: 污染不会逐渐死亡啦...很快就死了 06/11 23:31