作者inu0001180 (MIKE YU)
看板Biotech
标题[求救] transformation 疯狂爆盘TT
时间Fri Apr 28 10:54:46 2017
我想请问各位大大，小弟先将要的片段PCR P出来，在gel extraction 将要用的片段弄乾
净後，ligation 到Yeast T4DNA vector放室温20min~30min後放到4度overnight,隔天要
做的时候，再将ligation DNA回到室温20min~30min後在将ligation DNA加入1/3未融的DH
5a ，回插冰上30min然後放到42度heat shock 1min瞬间回插冰上5min,加入1mlLB broth,
移到37度incubator摇30分钟，取100ul未离心先涂盘，在用3000转5min慢速离心，将上清
液去除，留100ul 将菌团打散100ul涂盘，放37度incubator16hr,隔天取样，plate中心皆
有蓝白菌落大概20-30颗，但plate周围都是满满的爆盘，做了好几次都这样，菌液也都有
涂乾，不知道为什麽会这样请大家帮帮忙，还挑不到正确的菌落中
http://i.imgur.com/TOwUZit.jpg
http://i.imgur.com/OOj1gD5.jpg
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 223.138.173.212
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1493348088.A.7EE.html
1F：→ lail: 你的问题是？这样看起来还好啊 04/28 12:27
2F：→ blence: colony数量还好,外围的问题应该是plate问题 04/28 12:51
3F：→ blence: 叙述中没提到任何处理,最後怎麽会有蓝白菌落 04/28 12:52
4F：→ blence: 不过,如果DH5a是买来的,这样步骤长出来的效率颇差 04/28 12:53
5F：→ inu0001180: 谢谢大大们指教，小弟是用（50ul LB Broth+44ul x-gal 04/28 15:11
6F：→ inu0001180: +30ul ap+7ul IPTG)去涂盘在LB盘上 . DH5a我都是用CaC 04/28 15:11
7F：→ inu0001180: l2的方式去做处理，小弟是想问plate周围是没推开还是 04/28 15:11
8F：→ inu0001180: 菌死整片，因为我几乎推到都快推不动了 04/28 15:11
9F：→ asd03082002: 大部分的菌液都被推到边边了吧？能分享一下你涂盘的 04/28 15:33
10F：→ asd03082002: 手法吗 04/28 15:33
11F：→ inu0001180: 我都将菌液滴在中间 然後左手转盘右手拿三角啵棒顺时 04/28 18:17
12F：→ inu0001180: 钟划圈 04/28 18:17
13F：推 VincentYan: 菌液是涂到乾吗? 我不会涂乾，涂抹均匀後放烘箱自然烘 05/05 18:36
14F：→ VincentYan: 乾约1-2 hr，再翻面 05/05 18:36