作者haaaaaa (work hard work smart)
看板Biotech
标题[求救] 关於测collagen含量
时间Mon Nov 18 09:46:24 2013
最近用6cm dish养fibroblasts并打算抽取其上清及ECM中的collagen，不过遇到了困难，想在这里请教各位前辈，有没有什麽特别需要留意的地方…以下是我follow一篇paper中方法：以0.05M acetic acid将细胞刮下，并加入10mg/ML pepsin，4度反应隔夜，接着使用10000 rpm离心10分钟，取上清，并加入3倍体积之neutralization solution (200mM Tris,150mM NaCl)，最後将处理好的sample以USCN collagen type I ELISA kit进行测试。
可是一直测不到～陆续査了许多不同protocol ，有些提到要再用pancreatic Elastase处理并用硫酸铵沈淀。
也看过其他kit，前处理sample的方法大致与上述雷同。（当初是因为懒惰，看到USCN没有标明任何需要sample前处理的步骤，觉得好像很方便就买了…）
希望版上各位前辈能拨冗传授我一些该注意的事项～谢谢！！
By 好想测到collagen的人
P.s.手机排版有点失控，辛苦各位了～感谢耐心看完～
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 42.70.62.200
1F：推 dddd77915:我也正在测，但还在想要用哪个方法。如果是买ELISA是否 11/18 11:29
2F：→ dddd77915:有标准protocol 可以参照?你用哪家哪个货号的? 11/18 11:30
3F：→ haaaaaa:我目前是用MDbioproduct的kit(M036007)，我follow它的 12/25 14:30
4F：→ haaaaaa:protocol抽出collagen，测定时顺便测前处理有用到的 12/25 14:31
5F：→ haaaaaa:solution(acetic acid和TBS)结果前者有matrix effect~ 12/25 14:32
6F：→ haaaaaa:我觉得很怪~不知道有没有人用这个kit成功测得过耶~感谢!! 12/25 14:32