作者Marrisay (可爱的Comomo)
看板Biotech
标题[求救]stable cell line
时间Thu Nov 14 00:49:07 2013
各位大大好
我最近在建立stable cell line (使用HEK293)
transfect plasmid into cells後24hr
我换fresh的medium後(第二天)
隔天继续让cells长多一点(第三天)
在这几个步骤间我都有观察发萤光cells的比例
第二天及第三天比例都有在70%
但第四天准备要加G418筛选前
发现萤光cells的比例却降低至20%左右
不知为什麽会这样?
还是这是正常现象?
请各位大大能帮忙解惑
谢谢大家!
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◆ From: 58.114.221.18
※ 编辑: Marrisay 来自: 58.114.221.18 (11/14 00:56)
1F：→ williamyang:是transient transfection?时间过就会开始下降 11/14 08:28
2F：推 HEK293:episome 11/14 08:42
3F：推 tsubasawolfy:就一楼说的...去芜存菁 11/14 08:50
4F：→ xxtomnyxx:剩下会亮的 20% 不是一开始吃了特别多 plasmid，就是已 11/14 10:19
5F：→ xxtomnyxx:经嵌入 genomic DNA 变成 stable clone 了。 11/14 10:19
6F：→ xxtomnyxx:顺带一提，我连用带有SV40 ori的plasmid转到293T中，经 11/14 10:20
7F：→ xxtomnyxx:过6天也只剩下10%不到...... 11/14 10:21
8F：→ puec2:不错的资讯 11/14 10:51
9F：推 yanziyeh:可以试试看用infection建立stable clone 11/15 14:17
10F：→ puec2:没差吧 反正都要用挑的 11/15 14:53
11F：→ xxtomnyxx:我给个方向吧：Scaffold/Matrix Attachment region 11/15 15:52
12F：→ xxtomnyxx:等我回到研究所之後我打算用这个做做看，这是用episome 11/15 15:53
13F：→ xxtomnyxx:建立stable clone的方法，但是现在用这个技术的研究还不 11/15 15:53
14F：→ xxtomnyxx:普及。 11/15 15:53
15F：推 HEK293:S/MAR其实一阵子了喔...至少听闻Stanford已经做很开心去了 11/15 16:16
16F：→ xxtomnyxx:1990 就有啦～ 但是我没有看到很多用S/MAR做长时间over 11/15 16:19
17F：→ xxtomnyxx:expression或knock-down的paper。 11/15 16:19
18F：→ puec2:现在最红的是TALEN 11/15 16:46
19F：→ HEK293:之前不是还有transposon，睡美人或piggyBac之类的也行 11/15 16:50
20F：→ xxtomnyxx:但是那些都会插到genomic，有可能会改变genomic的表现 11/15 16:56
21F：→ puec2:那就多挑几个啊... transgenic plant还不是一样... 11/15 16:58
22F：→ puec2:TALEN的优势是你可以决定要插哪里呦 11/15 16:58
23F：→ puec2:理论上是不会乱插 >///< 11/15 16:59
24F：→ xxtomnyxx:怕就是怕在好死不死选到有功能的区域......很多序列到底 11/15 17:51
25F：→ xxtomnyxx:有什麽功能其实也都还未知，就算序列真的没功能，也可 11/15 17:52
26F：→ xxtomnyxx:能改变DNA长度让某些regulation elements异常，所以我才 11/15 17:53
27F：→ xxtomnyxx:比较喜欢episome (ˊ _>ˋ) 11/15 17:53
28F：→ puec2:用TALEN你可以直接插在你要改变的基因上阿... 11/15 20:24
29F：推 aceliang:那来个AAV如何? 11/15 20:42