作者ariel780102 (艾利儿)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE杂问
时间Tue Jul 23 19:13:25 2013
大家好,我是跑12% gel的SDS-PAGE,
使用大片胶的直立电泳槽,他里面就有水流的冷却装置(设置在4度C)
但每次都常常会容易歪掉(以最旁边最容易歪,跑一跑会变 / \ 这样,但中间还算是直的)
因为我sample多,所以一次要loading 13个well,旁边就很容易斜掉.
目前有在电泳槽外加上有深度的塑胶盒,跑胶时除了内部冷却还在外围堆上冰,
且碎冰随时补充.
出来的成果虽然有直一点但是要细部去看时最旁边还是斜斜的
我是固定电流前半小时20mA,之後跑到快跳海大约五~六小时设定在40mA,
设过35mA也是斜的.
APS现配,running buffer也是之前才配10X,其他SDS大约两年,Acrylamide一年多冰4度C
tris 也是冰两年左右(有调过pH值),不知是不是要换新的?
还有一个问题是band很不sharp,我是用coomassie brilliant blue G-250去染色,
因为之前有爬文说不能放太久,染剂避光保存已经一两年,是不是该换了呢?
还有爬文到说coomassie brilliant blue R-250的使用,因为我只是跑普通的12%的GEL
如果换成coomassie brilliant blue R-250 band会更sharp吗?
一堆问题 谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.93.128
※ 编辑: ariel780102 来自: 140.117.93.128 (07/23 19:14)
1F：推 leoblack:你跑太快了,我都是15mA从头跑到尾 07/23 19:30
2F：→ ariel780102:我一次跑两片胶,15mA也可以吗? 07/23 19:42
3F：→ Ianthegood:可以阿 电流越低才越稳吧 07/23 20:47
4F：→ blence:最两端空的well都补上PSB就不会外扩了 07/23 22:10
5F：推 leoblack:安培要加成,两片胶就30mA,你所谓的大片胶是多大!? 07/24 10:05
6F：→ dehydrogenas:我猜是17公分的 空的well要补满dye才不会歪 07/24 14:46
7F：→ ariel780102:电泳槽是Hoefer SE 600 Ruby,常宽大约有15cm吧 07/24 14:46
8F：→ ariel780102:长宽 07/24 14:46
9F：→ ariel780102:请问是补4Xdye吗? 07/24 14:48
10F：→ dehydrogenas:补一倍的 也有可能是你内槽有漏才会歪斜 07/24 14:49
11F：→ ariel780102:有仔细测漏过,应该是没有,且拿起来时下方没有残胶 07/24 23:40