※ 引述《cdkcyclin (ilovesuju)》之铭言： : 我的实验假设是A protein会增加N protein的表现量(或稳定度 或活性 尚未知) : 我的老板认为，同时co-transfect 表现A和N protein的plasmids到细胞内时， : 应该要看到N protein上升。 : 但我不这麽认为，因为这样变因就很复杂了。 : 不管是transfection efficiency的差异， : 或是promoter之间的竞争(因为两个plasmid皆由CMV调控)， : 但我老板似乎不接受我的看法， : 各位版友们有没有更详细的解释或是观点可以跟我讨论呢? : 谢谢各位! 有几个问题， 首先你使用的细胞株会表现 endogenous 的 A 和 N 吗？ 还有， A 与 N 的调控不知道是 DNA level、RNA level 还是 protein level， 如果 A 增加 N 的表现是透过增加 N 的 promoter 活性， 或是抑制 N 的 RNA 被降解的速度， 甚至是藉由 riboswich 增加 N 的 mRNA 转录活性， 而非 protein level 的调控， 那麽使用 co-transfection 表现的 N 基本上不怎麽会受 A 影响， 除非你的 plasmid 上面包含有 N 自己的 promoter、intron、3'和5' UTR， 不然用 co-transfection 是看不出任何改变的。 (不过如果用的是 N 的 promoter 就不叫 overexpression 了吧....) 所以用 co-transfection 只能判断是不是由 protein level 的调控。 如果是我来做， 我可能会尝试用： GFP A N + - - - + - - - + 1 : 1 : 0 1 : 0 : 1 0 : 1 : 1 刚好 6 well， 反正不管是 western blot 还是 RT-PCR 或 Q-PCR， 同时做 6 个和只做 2 个花的时间不会差太多。 (之中大概也只有 Q-PCR 的 probe 比较烧钱) 不过既然要解决这个问题， 那就顺便问一下： 你用的细胞株会表现 endogenous 的 A 和 N 吗？ 还有你打算用什麽方法看 A 和 N 的表现量？ Western blot? 还是 RT-PCR? 另外如果你担心的是 promoter 的 影响， 你可以多做一个用其它 promoter drive 的 N 或 A 来做实验阿。 EF1a、SV40、UbC 等等，应该不难拿的到这样的 vector 吧？ --

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