作者fall199721 (Wendy)
看板Biotech
标题[求救] EGF 保存期限
时间Tue Apr 30 15:59:38 2013
已有先爬过文, 如果还是有重复自删
最近再补EGF-stimulation的实验
但已经做了好几次,每次跑wb的结果都压不出P-EGFR
照理来讲, treat EGF 之後, EGFR磷酸化的部分应该是不会这麽难压
而且以前做过一两次也都没有问题...
最近重复几次,也换了一管分装的STOCK就是压不出来
我们家的EGF stock配好之後,分装冰再-20℃,
有需要用的时候再拿到冰上回温, 做实验的时候也是一直插在冰上,
以确保他不会坏掉
我实在是不知道问题出在哪里....现在有打算再换一管stock试试看
但是又怕是不是我做实验的过程有问题
所以想请问各位要做EGF stimulation相关实验的时候, 是怎麽做的
我的protocal如下:
seeding cell(通常我会seeding 5*10^5 in 60mm culture dish)--->
隔天先用serum-free的DMEM starvation 30mins
之後treat 10ng/ml EGF
开始收时间点
谢谢大家看(问题实在是有点长...
也麻烦大家了>"<
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◆ From: 140.116.93.172
※ 编辑: fall199721 来自: 140.116.93.172 (04/30 16:00)
1F：→ saviora:那有Positive control嘛 04/30 16:06
2F：推 vancent:先去看expire date吧= = 04/30 16:08
3F：→ genep:时间点是? 04/30 23:50
4F：推 hsuwenli:这边是A431 cell,3小时刺激就有反应 05/10 18:35
5F：→ hsuwenli:磷酸化的反应 05/10 18:35
6F：→ hsuwenli:25ng/ml 05/10 18:36