作者chun770526 (chun°)
看板Biotech
标题[求救] a-SMA萤光染不出来
时间Wed Mar 27 11:18:26 2013
最近在染 a-SMA(sigma) 的萤光
我是用24well plate种细胞，三天跟七天後收
1. 用4% paraformaldehyde 固定10min
2. PBS wash 5min*3
3. 抽乾PBS後加入 P/T (PBS+0.1% TritonX-100) 30min
4. PBS wash 5min*3
5. 用P/S (PBS+5% heat inactivated serum) blocking
6. 加入primary antibody (1:50) 4C O/N，
7. wash 10min*3
8. 加入2抗 (1:200) 2hr，避光
9. wash 5min*3
10. 染DAPI 1min抽掉
11. 200X拍照
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我看网路上的a-SMA以及抗体附上的datasheet，都有很明显很漂亮的线状
可是我染出来都没有，不知道是不是用24 well plate的关系?
会跟玻片的差很多吗?
附上我的萤光图
http://tinyurl.com/dxr5cwu (3days)
http://tinyurl.com/c7hpkx6 (7days)
不好意思麻烦各位了谢谢。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.27
1F：→ abcam:改别家抗体试试呀.. 03/27 17:43
2F：→ abcam:背景有点脏ㄟ.... 03/27 17:44
3F：→ abcam:用cover glass应该会好很多~ 03/27 17:44
4F：推 jabari:改用abcam的抗体... (这算工商服务吗QwQ? XD) 03/27 22:17
5F：推 tchan:抗体多试几个条件吧，然後若非特殊需求，细胞满度可以降 03/28 08:12
6F：→ vandia:这串推文好有趣 XD 03/29 17:05
7F：推 abcam:不要用abcam 好了...Dako的抗体比较好..XD(实话!) 03/30 23:30
8F：推 hohotest:楼上abcam.... 04/02 18:35
9F：推 greendeer:你的titer太高了啦，所以才那麽脏，做个稀释吧 04/05 21:32
10F：推 bigbear33:serum来源是甚麽物种 04/07 22:48
11F：推 homeshawn:推三楼cover glass 05/29 03:25