作者jkq (玩具)
看板Biotech
标题[求救] PCR位置不对
时间Wed Mar 6 09:06:43 2013
请问各位大大
最近在做ligation insert 1k vector 7.3k
transformation後 有长一颗 就直接抽plasmid
之後拿plasmid 去PCR 发现 用vector上的primer夹出来比预计多500bp左右
但用当初夹insert的primer 又夹的出来
拿去做RE剪切 位置又高出500bp左右 切位用BamHI PstI
想请问 如果这plasmid是错的 为什麽也能夹出insert
请各位高手赐教了 如需要什麽资讯 小弟再提出
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 123.205.158.77
1F：→ shenhsu:primer不够专一 insert内容应该是错的 订个序就会知道了 03/06 11:47
2F：→ shenhsu:再不然就是ligation的时候除了1k的insert不也塞了其他东西 03/06 11:49
3F：→ shenhsu:还有就是...你确定vector上的primer跟切位是紧邻insert的? 03/06 11:51
4F：→ jkq:不是紧连着 我有算过 比预计多五百 03/06 13:11
5F：推 shiningspark:送定序不就有答案了吗? 1K也没多少钱 03/07 10:49
6F：→ jkq:小弟我今天要送了 谢谢各位 03/07 11:51