作者ohyeh1021 (史前巨熊)
看板Biotech
标题[问题]关於蛋白纯化
时间Thu Nov 1 13:05:17 2012
最近刚好在纯化蛋白
实验室的protocol是
利用nickel column先做初步的纯化
再使用gel filtration做第二步的纯化
第一个问题是
第二步的gel filtration会不会使sample"流失"很多?
第二个问题是
爬文有看到说利用TALON抓His-taq,可获得纯度较高的Protein.
那是否就无需再做gel filtration?
第三个问题是
nickel纯化完的杂band是否与表现系统有关?
原Po目前使用的是insect cell expression,gel filtration後可以看到其他的peak
而使用E coli expression,gel filtration只有单一的peak
谢谢大家的指导
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.65.186
1F：→ trumpet:1. 看你的GF column大小，愈大体积会损失愈多 11/01 13:36
2F：→ trumpet:GF完後浓度也会被稀释掉，如果需要浓度高点，可能还得浓缩 11/01 13:37
3F：→ trumpet:2. 作GF除了移除杂质，还有aggregate，端看你实验的要求 11/01 13:38
4F：→ trumpet:3. 跟表现系统有关，也和纯化wash的方法有关 11/01 13:39
5F：→ trumpet:表现系统可能会有非专一性的吸附产生杂质 11/01 13:39
6F：→ trumpet:适当的wash可以减少非专一性的吸附，达到降低杂质的结果 11/01 13:40
7F：→ ohyeh1021:可以说纯度跟产量是成反比？ 11/01 15:48