作者martyrtitan (Martyrs)
看板Biotech
标题Re: [求救] transfer 糊掉
时间Fri Jun 22 08:46:59 2012
※ 引述《spirithorse (咩)》之铭言：
: 标题: [求救] transfer 糊掉
: 时间: Thu Jun 21 17:38:20 2012
:
: traget protien: 10~15KDa (in 12% sds gel)
: transfer condition: 0.22 um PVDF, 400mA 1hr
: 因为一直都压不到我的protein, 下图是将PVDF染Ponceau S後的结果
:
: http://ppt.cc/~mDh
: http://ppt.cc/StAV
:
把你的胶也拿去染CBR或者是一些商业配方
如果还有残留
且残留也出现这样的问题....
就是你的胶没铸好
可能是有些漏液
如果没有这情形...
我自己的经验是Buffer过热造成
或者是...没夹紧也有可能
另外
Western blotting会因为你的胶的大小、membrane大小、乾湿式、注入多少蛋白
甚至连带buffer温度都会差很多
可以提供更详细的资料 这样会比较好判断
题外话
我自己用hoefer 10*8cm 开450mA (湿)
transfer tank丢cooler 开-5度 overnight(~20 hrs)也都没过头过 (15kda以上)
甚至都还有可能残留 (20ug~37.5ug)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.42.73.156
1F：推 spirithorse:感谢 06/22 11:24
2F：推 puec2:看就知道没夹紧啦 图画纸放几张？ 06/23 03:07
3F：→ spirithorse:我放三张..看来还是不够,下次会在多加一张PVDF 06/23 23:19
4F：→ puec2:还有一种可能 是你的buffer有问题 gel 在transfer中变形 06/25 16:49
5F：推 spirithorse:谢谢!transfer我是跟其他人一样的配方,下次我会染gel 06/26 19:21