作者PHW (Fcrescent)
看板Biotech
标题[求救] ligation只会出现正接
时间Sun Jun 10 23:07:30 2012
大家好,
我目前的constrcut是要将两个plasmid用Hind III 各切一刀
其中一个切完後做CIP处理，再接上另一个
A plasmid带抗Amp基因, B plasmid带抗Spe基因
所以只要能在LB+Amp+Spe的plate上长出来就基本上是我要的东西了
但基於後续转殖後想利用plasmid rescue做插入点检测
所以想选反接的construct, 但目前我做起来全是正接...
正接是会两个Ubiquitin promoter 方向都一样 ( → gene → gene) →:promoter
反接则是两个promoer为背对反向 ( gene ←→ gene )
因为之前我做过一样的construct 但两个promoter各别为 35S 和ubiquitin promoter
这就很顺利筛选出正反接都有的construct
但这次换成两个Ubiquitin就不知道为何全是正接
是在猜该不会反接会使菌产生毒蛋白让菌死掉, 剩正接的菌会活着...
不知道各位有没有类似经验的?
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